Agar tripticaseína soja: justificativa, preparação e usos - Ciência - 2023

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o Trypticasein Soy Agar ou Trypticase Soy Agar é um meio de cultura sólido, não seletivo e nutritivo. É designado pelas letras TSA por sua sigla em inglês Trypticase Soy Agar. É composto de tripteína, peptona de soja, cloreto de sódio e ágar-ágar.

Devido ao seu alto poder nutritivo, é ideal para o cultivo de microrganismos moderadamente exigentes e não exigentes. O meio sem suplementos adicionais não é recomendado para culturas primárias, mas é muito útil para subcultivar linhagens puras e mantê-las viáveis, entre outros usos.

Além disso, esse ágar serve de base para a preparação de meios enriquecidos como o ágar sangue, principalmente quando é necessário observar os padrões de hemólise e montar os táxons de optoquina e bacitracina, necessários ao diagnóstico de Streptococcus pneumoniae Y Streptococcus pyogenes respectivamente.

Por outro lado, quando combinado com antibióticos, é útil para isolar microorganismos facultativos e anaeróbios estritos clinicamente importantes de amostras com flora mista.

Finalmente, a composição do ágar tripticaseína soja e seu desempenho atendem aos requisitos estabelecidos pelas diferentes farmacopéias (européia, japonesa e norte-americana).

Base

Para o bom desenvolvimento das bactérias, é necessária a presença de suprimentos de energia, como aminoácidos, vitaminas, bases puricas e pirimídicas.

Nesse sentido, a tripteína e a peptona de soja fornecem esses nutrientes aos microrganismos, permitindo seu pleno desenvolvimento. No entanto, para bactérias fastidiosas é necessário suplementar este ágar com sangue desfibrinado ou sangue aquecido para aumentar seu enriquecimento.

Por outro lado, se forem adicionados antibióticos ao meio, ele se torna um meio seletivo. Extrato de levedura de 0,6% também pode ser adicionado para favorecer o isolamento de espécies do gênero Listeria, enquanto a adição de telurito de cistina Y sangue de cordeiro é ideal para Corynebacterium diphteriae.

Finalmente, o cloreto de sódio fornece o equilíbrio osmótico ao meio e o ágar fornece a consistência sólida.

Preparação

Placas de Agar de Soja Tríptico

Para o preparo do ágar tripticaseína soja, 40 g do meio comercial desidratado devem ser pesados em balança digital. Dissolve-se em um litro de água destilada contida em um frasco.

A mistura é deixada em repouso por 5 minutos e posteriormente levada a uma fonte de calor para auxiliar na dissolução do meio. Deve ser mexido com freqüência e fervido por 1 a 2 minutos. Posteriormente, o meio é esterilizado em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Deixe esfriar a 50 ° C e distribua em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar, inverta, encomende em plaqueros e guarde na geladeira.

O pH final do meio deve ser 7,3 ± 0,2.

Ressalta-se que a cor do meio de cultura desidratado é bege claro e deve ser armazenado entre 10 a 35 ° C, em local seco.

Por sua vez, o ágar preparado é de cor âmbar claro. As placas preparadas devem ser armazenadas no refrigerador (2-8 ° C) até o uso.

As placas devem atingir a temperatura ambiente antes do uso.

Placas de ágar soja tripticaseína suplementadas com sangue

O ágar sangue é preparado adicionando 5% de sangue desfibrinado no momento do resfriamento do ágar tripticaseína soja a 50 ° C. A mistura é homogeneizada por rotação com movimentos suaves.

Sirva em placas de Petri esterilizadas. A cor do meio deve ser vermelho cereja.

Placas de ágar soja tripticaseína suplementadas com sangue aquecido

Para preparar o ágar sangue à base de TSA, proceda da mesma forma que os procedimentos já descritos, mas ao sair da autoclave, deixe repousar até que a temperatura do meio esteja aproximadamente entre 56 a 70 ° C.Nesse momento, o sangue é colocado e misturado até que o meio fique marrom.

Sirva em placas de Petri esterilizadas. A cor do meio é marrom chocolate.

Cunhas de Agar de Soja Tríptico

O procedimento de preparo do ágar é o mesmo descrito para as placas, com a diferença que ao invés de servir o meio em placas de Petri, ele é distribuído de 10 a 12 ml em tubos com tampas de baquelite antes da esterilização.

Posteriormente, os tubos são autoclavados a 121 ° C por 15 minutos. Quando saem, são inclinados com a ajuda de um suporte e podem se solidificar.

As cunhas preparadas são semeadas por área de superfície e servem para manter certos microrganismos não exigentes viáveis por um tempo especificado.

Formulários

O Agar de Soja Trypticasein é usado nos seguintes casos:

-Como base para preparar o ágar sangue clássico, usado rotineiramente na maioria dos laboratórios.

-Isolamento de bactérias exigentes.

-Observação do padrão de hemólise.

-Execução de testes de diagnóstico.

-Como base para preparar ágar sangue especial para Corynebacterium diphteriae, com telurito de cistina Y sangue de cordeiro.

- Como base para preparar ágar sangue de cordeiro, além de canamicina-vancomicina para o crescimento de anaeróbios, especialmente Bacteroides sp.

–Para manutenção de cepas não exigentes (Bacterioteca).

–Contagem microbiana aeróbia no estudo dos limites microbianos de amostras de água, meio ambiente, alimentos e cosméticos.

Semeado

As amostras podem ser semeadas diretamente na superfície do Ágar de Soja Trypticasein suplementado com sangue ou outros aditivos. É semeado pela exaustão.

Considerando que, placas de ágar tripticaseína soja sem aditivos são geralmente usadas para subcultura de cepas microbianas (bactérias ou leveduras).

Controle de qualidade

Controle de esterilidade

Para verificar a esterilidade dos diferentes meios preparados com ágar tripticaseína à base de soja, é recomendado fazer o seguinte: de cada lote preparado, 1 ou 2 placas ou tubos não inoculados devem ser incubados a 37 ° C por 24 horas para demonstrar sua esterilidade. Em todos os casos, deve permanecer sem crescimento.

Se houver contaminação, todo o lote deve ser descartado.

Controle de crescimento

As seguintes cepas bacterianas podem ser usadas para estudar o funcionamento adequado do ágar tripticaseína soja:Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 eEnterococcus faecalis ATCC 29212.

As cepas são semeadas e incubadas aerobicamente a 37 ° C por 24 horas.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório.

Você também pode usar cogumelos como ComplexCandida albicans ATCC 10231 e Aspergillus niger ATCC 16404. Espera-se um bom crescimento para ambas as cepas.

Controle de crescimento e padrão de hemólise de ágar tripticaseína soja suplementado com sangue

Para verificar o funcionamento adequado do ágar sangue preparado com esta base, as seguintes cepas podem ser utilizadas: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 eStreptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Eles são semeados e incubados a 37 ° C em microaerofilicidade por 24 horas.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório, levando-se em consideração que em S. pyogenes beta-hemólise (halo claro ao redor da colônia) deve ser observada e em ambas as cepas de S. pneumoniae hemólise alfa (halo esverdeado ao redor das colônias) deve ser observada.

Referências

Colaboradores da Wikipedia. Trypticase I am agar. Wikipédia, a enciclopédia livre. 17 de dezembro de 2018, 15:47 UTC. Disponível em: https://en.wikipedia.org
Britannia Laboratories. Ágar tripteína de soja. 2015. Disponível em: britanialab.com
Neogen Laboratories. Ágar soja tríptica. Disponível em: foodsafety.neogen.com
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana S.A.
Laboratórios BD. Trypticase I am Agar. 2014. Disponível em: .bd.com