Coloração da cápsula: justificativa e técnicas - Ciência - 2023

Contente

o coloração da cápsula é uma técnica de coloração diferencial que tem a propriedade de realçar a estrutura polissacarídica que envolve certas bactérias e leveduras denominada cápsula. É usado em laboratórios clínicos para ajudar no diagnóstico de certas patologias causadas por microrganismos encapsulados.

É também utilizado em laboratórios de ensino para demonstração dessa estrutura morfológica a estudantes de carreiras das ciências da saúde, tais como: medicina, bioanálise, enfermagem ou citotecnologia, entre outras.

Existem várias técnicas simples para demonstrar a presença da cápsula nos microrganismos que a possuem, a saber: coloração negativa, coloração de Anthony e uma variante que combina as duas anteriores.

A coloração negativa é usada principalmente em amostras de LCR quando há suspeita de presença de levedura Cryptococcus neoformans. Esta levedura é uma causa comum de meningite.

Esta técnica utiliza nigrosina ou tinta nanquim e baseia-se na criação de um contraste entre o fundo da preparação e a cápsula impenetrável do microrganismo. O fundo é manchado de escuro e a cápsula é incolor. Desta forma, essa estrutura é revelada.

Em relação à técnica de Anthony, pode-se dizer que ela é mais utilizada em laboratórios de ensino para demonstrar a estrutura polissacarídica em bactérias como Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae Y Neisseria meningitidis.

A utilização dessa técnica para fins diagnósticos é muito rara, visto que existem outros exames de rotina que permitem a identificação desses microrganismos.

Base

A cápsula é uma estrutura forte de natureza polissacarídica. Isso protege os microrganismos da fagocitose e, portanto, é uma estrutura difícil de penetrar.

É por isso que as manchas em cápsula são baseadas no contraste. Os corantes mancham o fundo da preparação enquanto a cápsula permanece incolor.

Portanto, com essas técnicas, a cápsula é facilmente reconhecível. Se o microrganismo não tiver cápsula, não será distinguível com este tipo de coloração, pois tudo ficará manchado da mesma cor.

Todas as técnicas utilizadas para colorir a cápsula têm o mesmo raciocínio, apesar de usarem corantes e procedimentos diferentes.

Técnicas parapara coloração de cápsula

- mancha de Anthony

A mancha de Anthony usa violeta cristal como uma mancha. Isso manchará o corpo bacteriano e o fundo de roxo.

Por outro lado, 20% de sulfato de cobre é usado. Este serve como solução de lavagem, ou seja, remove o excesso de cristal violeta do preparo, tornando as cápsulas transparentes, mas sem que o corpo bacteriano ou o fundo percam a cor.

materiais

- Leite iridescente.

- Deslizar.

- 1% de cristal violeta.

- 20% de sulfato de cobre.

- Microscópio óptico.

- Óleo de imersão.

Processo

Esta técnica consiste em:

Cultive o microorganismo em leite iridescente por 36 horas.
Coloque uma gota da cultura na ponta de uma lâmina e ao lado dela coloque uma gota de vidro violeta, misture e espalhe com a ponta de outra lâmina.
Seque ao ar livre e não coloque no calor.
Lavar com solução de sulfato de cobre a 20% e deixar secar ao ar.
Observe ao microscópio com objetiva de imersão. Pesquise nas extremidades da propagação.

É importante não usar calor para fixar ou secar, pois isso danifica a cápsula. Também não lave com água.

Interpretação

Leite iridescente é um excelente meio de cultura, pois fornece os nutrientes necessários para o microrganismo desenvolver uma cápsula proeminente.

Por outro lado, o leite iridescente formará um fundo grosso e compacto que ficará manchado de roxo junto com o corpo bacteriano, mas a cápsula que envolve o microrganismo permanecerá incolor. Portanto, um halo claro é observado ao redor do corpo bacteriano.

Vantagem

É uma técnica simples de executar. Não requer conserto.

Além disso, deve-se notar que outros meios de cultura podem ser usados, mas o meio de leite é o preferido porque tem a vantagem de fornecer cápsulas mais proeminentes.

Desvantagens

É uma técnica um pouco mais trabalhosa do que a coloração negativa e sua visualização requer esperar que o preparo seque completamente.

- Coloração negativa

materiais

- Lâminas de microscópio.

- Meio de cultura com o microrganismo.

- Tinta da China ou nigrosina.

- Microscópio óptico.

- Solução salina fisiológica.

Processo

Coloque uma gota de solução salina fisiológica na lamela e dissolva uma pequena porção da cultura microbiana. É importante que a preparação não seja muito espessa. Em seguida, coloque uma gota de tinta da China ou nigrosina e misture.

Uma folha de lamínula é então colocada sobre a preparação sem transbordar o líquido. Ele é observado ao microscópio, primeiro focando em uma objetiva de 10X e depois movendo para 40X.

Esta técnica também pode ser usada diretamente em amostras de CSF. Ou seja, em vez de colocar uma gota de cultura microbiana, é colocada uma gota de LCR.

Vantagem

É um método simples de executar e ao mesmo tempo barato. Não requer fixação ou secagem do preparado.

Desvantagens

A desvantagem é que deve ser observado ao microscópio antes que o preparo seque, pois caso isso ocorra os microrganismos se contraem, o que dificultará a visualização.

Por outro lado, podem ocorrer falsos positivos se o analista for inexperiente, já que leucócitos costumam ser confundidos com leveduras.

A observação de cápsulas de levedura com tinta da China ou técnica de nigrosina deve ser considerada como um diagnóstico presuntivo de Cryptococcus neoformans até que seja demonstrado com a cultura.

Isso ocorre porque existem outras leveduras que podem ser a causa da meningite e não apenas a Cryptococcus neoformans, como os do gênero Candida e Rhodotorula, além de outras espécies de Cryptococcus.

Interpretação

Se houver microrganismos encapsulados, será observado um fundo escuro, com corpos transparentes flutuando no líquido, destacando a presença da cápsula.

- Técnica de tinta indiana

Essa técnica também pode ser feita com nigrosina. É uma combinação das técnicas explicadas anteriormente. Essa técnica usa violeta cristal e tinta da Índia ou nigrosina.

O corpo bacteriano fica roxo do cristal violeta porque tem carga negativa, enquanto a nigrosina colore a parte inferior do esfregaço. Se a bactéria tiver uma cápsula, ela aparecerá como um halo transparente ao redor do microorganismo.

O violeta cristal pode ser substituído por qualquer uma destas cores: safranina, fucsina básica ou azul de metileno.

materiais

- Vidro violeta.

- Nigrosina ou tinta nanquim.

- Lâminas de microscópio.

- Microscópio.

Processo

- Cultive o microrganismo em meio de cultura.

- Coloque uma gota da cultura na ponta de uma lâmina e ao lado dela coloque uma gota de nanquim cristalino ou nigrosina, misture e espalhe com a ponta de outra lâmina.

- Seque ao ar livre e não fixe ao calor.

- Cubra com uma solução de cristal violeta por 1 minuto, lave com água destilada mas muito delicadamente (jato suave), deixe secar ao ar livre.

- Observe ao microscópio com objetiva de imersão. Pesquise nas extremidades da propagação.

Interpretação

Um corpo bacteriano de cor violeta e um fundo escuro serão vistos. A cápsula, se presente, parecerá incolor ao redor da bactéria.

Referências

Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Técnicas básicas de Microbiologia. Observação de bactérias. Reduca (Biologia). Microbiology Series. 2010; 3 (5): 15-38. D
López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Corantes básicos no laboratório de microbiologia. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Disponível em: medigraphic.com
Gil M. Coloração negativa: justificativa, técnica, vantagens e desvantagens. Lifeder.com.
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana S.A
Tankeshwar A. Capsule Stain: Princípio, Procedimento e Resultados. 2019. Guia de Microbiologia Médica. Disponível em: microbeonline.com