Agar cetrimida: justificativa, preparação, usos - Ciência - 2023
science
Contente
o ágar cetrimida o cetrimida é um meio de cultura sólido seletivo, projetado para o isolamento de Pseudomonas aeruginosa. É baseado na demonstração da produção de pigmentos característicos desta espécie e foi feito a partir da modificação do ágar Tech, criado por King, Ward e Raney.
A fórmula original continha sais de cloreto de magnésio, sulfato de potássio, digestão pancreática de gelatina e ágar-ágar. A modificação da fórmula consistiu na adição de cetrimida (brometo de cetiltrimetilamônio) e glicerol.
O ágar cetrimida é útil para o estudo microbiológico de amostras onde a presença de Pseudomonas aeruginosa.Ressalta-se que esta bactéria é extremamente importante, pois embora faça parte da microbiota ambiental normal, freqüentemente se comporta como um patógeno oportunista.
Por esse motivo, um dos problemas mais comuns causados por esse germe são as infecções nosocomiais, ou seja, aquelas que ocorrem em ambiente hospitalar, acometendo pacientes com sistema imunológico deprimido.
Por outro lado, devido à afinidade que este microrganismo possui com a umidade, os alvos de contaminação mais vulneráveis são: equipamentos de respiração assistida, medicamentos, nebulizadores, fontes de água, condicionadores de ar, desinfetantes, soluções de sabão, soluções injetáveis, feridas abertas , cateteres, tubos urinários, entre outros.
Nesse sentido, o ágar cetrimida é útil para a realização de controles microbiológicos e culturas dos elementos citados anteriormente.
Base
O ágar cetrimida é baseado na capacidade do meio de promover o crescimento de P. aeruginosa, estimulam a produção de seus pigmentos e, por sua vez, inibem o crescimento de outros microorganismos.
Essas propriedades se devem à função de cada um de seus componentes. A peptona de gelatina presente serve como fonte de nitrogênio, vitaminas e minerais. Glicerol ou glicerina funcionam como fonte de carbono.
Por sua vez, a cetrimida (brometo de cetiltrimetilamônio) é a substância que inibe o crescimento de bactérias que não P. aeruginosa, incluindo outras espécies pertencentes ao mesmo gênero.
A inibição ocorre porque a cetramida atua como um detergente catiônico, conseguindo desestabilizar a membrana plasmática da maioria das bactérias, exceto para P. aeruginosa e alguns outros que conseguem sobreviver.
Por outro lado, contém cloreto de magnésio e sulfato de potássio. Esses compostos estimulam a expressão fenotípica relacionada à capacidade de Pseudomonas aeruginosa para produzir vários pigmentos, incluindo: piocianina, pyoverdina, piorubina, piomelanina e fluoresceína. Por fim, contém ágar-ágar, o que lhe confere uma consistência sólida.
Interpretação
A interpretação do crescimento obtido neste ágar é realizada da seguinte forma:
A observação de colônias arredondadas e lisas com bordas regulares, com produção de pigmentos azul esverdeado, verde, marrom ou avermelhado, além da emissão de odor frutado (aminoacetofenona), é um resultado presuntivo da presença dessa bactéria na referida amostra.
Além disso, é indicativo de P. aeruginosa a observação de um pigmento amarelo-esverdeado brilhante nas colônias quando a placa é exposta à luz ultravioleta.
Deve-se ressaltar que cada cor observada se deve à produção de um pigmento específico. O pigmento azul esverdeado corresponde à produção de piocianina, o verde à pyoverdina, o avermelhado à piorubina, o marrom à piomelanina e a fluorescência amarelo-esverdeada brilhante sob luz ultravioleta à fluoresceína.
Preparação
Pesar 43 g do meio desidratado e dissolver em água destilada. Adicione 10 ml de glicerol. Leve a mistura para uma fonte de calor. Deixe ferver por alguns minutos até que esteja completamente dissolvido.
Autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Deixe repousar e sirva em placas de Petri esterilizadas quando a temperatura estiver em torno de 50 ° C.
Deixe solidificar, inverta, encomende em plaqueros e guarde na geladeira até o uso. As placas de ágar Cetrimida devem ser removidas do refrigerador com antecedência e deixadas aquecer até a temperatura ambiente para a semeadura.
O pH final do meio deve ser 7,2 ± 0,2.
A cor do meio desidratado é bege e a preparação é branca opaca.
Formulários
No ágar cetrimida, todos os tipos de amostras em que a presença de Pseudomonas aeruginosa. Portanto, é útil em todas as áreas da microbiologia (ambiental, industrial, clínica, água e alimentos).
É de grande importância analisar os ambientes hospitalares e assim poder aplicar medidas corretivas, uma vez que esse microrganismo atinge os pacientes por meio de equipamentos, medicamentos, soluções e insumos contaminados que são utilizados pelo paciente.
Dessa forma, o microrganismo pode infectar o trato respiratório inferior, o trato urinário e feridas de pacientes imunossuprimidos.
Colônia conta de P. aeruginosa em testes de limite microbiano.
Semeado
O ágar cetrimida pode ser usado como cultura primária. A placa é inoculada em uma de suas bordas e de lá é distribuída por exaustão para o resto da placa. As amostras líquidas podem ser semeadas na superfície com uma espátula drigalski.
As placas são incubadas aerobicamente a 37 ° C durante 24 horas de incubação.
Limitações
-Uma pequena porcentagem de cepas dePseudomonas aeruginosas eles não produzem piocianina, portanto, um falso negativo pode ser interpretado.
-Algumas espécies de Pseudomonas de importância clínica são inibidas neste meio.
Apesar de observar as características descritas para Pseudomonas aeruginosa, deve ser corroborado com prova adicional de identificação. Um teste que não deve faltar é o teste da oxidase, deve dar positivo.
-Algumas Enterobacteriaceae podem crescer neste meio e desenvolver um pigmento amarelo, mas difere de Pseudomonas aeruginosa em que quando a placa é submetida à luz ultravioleta não há fluorescência.
–Serratia marcescens consegue desenvolver e produzir um pigmento rosa.
- Se as placas semeadas com ágar cetrimida forem expostas por um tempo à temperatura ambiente, as cepas de P. aeruginosa eles podem perder a fluorescência observada sob luz ultravioleta, porém a propriedade é recuperada se for reincubada a 37 ° C.
Controle de qualidade
As cepas de controle podem ser usadas para analisar o bom desempenho do ágar cetrimida, como: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 eStaphylococcus aureus ATCC 25923.
Os resultados esperados são:
- Para P. aeruginosa bom crescimento, com pigmento verde azulado e fluoresceína positiva.
- S. maltophilia Y S. aureus eles serão parcialmente a completamente inibidos.
- Espera-se que Escherichia coli é completamente inibido.
Referências
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Caracterização fenotípica e sorológica de isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Laboratórios Conda Pronadisa. Base de ágar cetrimida. 2014. Disponível em: condalab.com
- Britannia Laboratories. Ágar cetrimida. 2015. Disponível em: britanialab.com
- Laboratórios BD. Agar BD Pseudosel (Agar Cetrimida). 2013. Disponível em: bd.com
- Laboratorio Francisco Soria Melguizo, C.A. Ágar cetrimida. 2009. Disponível em: http://f-soria.es