Meio Stuart: base, preparação e usos - Ciência - 2023

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o Stuart médio É um ágar semissólido ou caldo sem nutrientes, utilizado para o transporte de amostras biológicas. Sua finalidade é manter as cepas presentes na amostra viáveis ​​por certo tempo, mas sem aumentar a população microbiana.

Foi criado por Moffet, Young e Stuart em 1948 e posteriormente modificado por Toshach e Patsula. É composto por glicerofosfato de sódio, tioglicolato de sódio, cloreto de cálcio e ágar-ágar. Este último está presente no meio semissólido e ausente no líquido. Alguns laboratórios adicionam azul de metileno a ele.

Geralmente são usados ​​quando não é possível semear a amostra imediatamente. Nesse caso, a amostra é colocada no meio de transporte, enquanto é transferida para o laboratório que processará a cultura.

Isso garante que os microrganismos presentes permaneçam vivos até que sejam inoculados no meio de cultura correspondente.


Inicialmente, seu uso destinava-se ao transporte de amostras uretrais ou vaginais onde a presença de Neisseria gonorrhoeae. Mais tarde, eles perceberam que sua utilidade poderia ser mais ampla.

O meio de Stuart provou ser muito eficiente na preservação de microrganismos lábeis e fastidiosos, como Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertussis, entre outros. Além de outros microorganismos não irritantes, como Enterobacteria.

O meio Stuart basicamente evita a dessecação da amostra, mantém o equilíbrio osmótico e mantém os microrganismos em um pH ideal. Por outro lado, estrategicamente esse meio não contém nutrientes, evitando que os microrganismos se multipliquem.

No mercado existem dispositivos especiais de transporte de amostras que contêm este ou outro meio de transporte, denominado culturette. Eles também podem ser preparados em laboratório.


Base

O objetivo do meio de transporte Stuart é manter as amostras o mais próximo possível de sua condição original até que sejam processadas.

O glicerofosfato de sódio e o cloreto de cálcio são um sistema tampão que atua mantendo o pH e a osmolaridade.

Já o tioglicolato de sódio atua como agente redutor e, no caso de conter ágar, isso lhe confere uma consistência semissólida, para retardar a oxigenação do meio. Por fim, o azul de metileno é um indicador de oxidação, ou seja, detecta a presença de oxigênio.

O meio semissólido com indicador redox é ideal para o transporte de amostras onde há suspeita de presença de bactérias anaeróbias.

Características do meio de transporte

O meio Stuart, como todos os meios de transporte, atende a certas características, incluindo:

-Mantém cepas microbianas viáveis ​​presentes sem se multiplicar.

-Não contém nutrientes; Seus compostos visam manter a amostra hidratada, em condições adequadas de pH e osmolaridade.


-Inibe a autólise de alguns microrganismos delicados, como o pneumococo.

-Seu uso é temporário, não deve ser prolongado por muito tempo.

Preparação

Meio Stuart semi-sólido com indicador redox

Preparação em casa

Ingredientes

Glicerofosfato de sódio 10 gr

Tioglicolato de sódio 1,0 gr

Cloreto de cálcio 0,1 gr

Azul de metileno 0,002 gr

Agar-agar 3 gr

Água destilada 1 L

Misture os componentes e aqueça até dissolver completamente. Despeje em tubos ou cotonetes especiais. São introduzidos na autoclave e esterilizados a 121ºC por 15 minutos. Deixe os tubos esfriarem na posição vertical (em forma de bloco). Mantenha em temperatura ambiente.

Preparação com meio comercial

Pesar 14,1 g do meio em 1 litro de água destilada. Aquecer, mexendo sempre, até dissolver completamente, pode ser fervido. O resto do procedimento já foi descrito.

O meio desidratado é de cor creme e o preparado deve ser azul em sua superfície. Isso se deve à presença de azul de metileno.

O pH do meio deve ser ajustado para 7,4 ± 0,2

Meio Stuart Modificado Líquido (caseiro)

Ingredientes

Glicerofosfato de sódio 10 gr

Tioglicolato de sódio 1 gr

Cloreto de cálcio dihidratado 0,1 gr

Água destilada 1000 ml

Possui os mesmos ingredientes do semissólido, mas não contém ágar ou azul de metileno. Neste caso, os componentes são misturados sem aquecimento e 0,5 ml são distribuídos em tubos de 16 x 125 mm com tampas de rosca.

Esteriliza-se em autoclave a 121 ° C por 10 minutos. Para amostragem, zaragatoas dacron devem ser utilizadas se a amostra for para PCR ou rayon se for para cultura.

Os tubos são armazenados em temperatura ambiente.

Formulários

Comercialmente, existem dispositivos especiais de transporte de amostras chamados culturette; Este dispositivo é um tubo longo e fino que contém um cotonete e na extremidade há um segmento que contém o meio Stuart semissólido ou líquido.

O dispositivo é aberto e a amostra é coletada com o cotonete. É então introduzido de volta no tubo até que a ponta do swab seja inserida no meio de transporte semissólido; alguns trazem uma esponja de poliuretano impregnada com meio Stuart líquido, com a qual a amostra é preservada mantendo-a úmida.

Caso se suspeite da presença de microrganismos delicados, deve-se usar cotonetes com carvão para a coleta da amostra.

As amostras que podem ser coletadas com zaragatoas ou zaragatoas e transferidas neste meio são exsudatos faríngeos, zaragatoas retais e várias secreções, incluindo: vaginal, uretral, ferida, ocular, ótica e abscesso.

Durante a transferência da amostra no meio de transporte para o laboratório, deve-se evitar sujeitar o meio a condições ambientais extremas (muito frio ou muito quente). Mudanças repentinas na pressão atmosférica também devem ser evitadas.

O tempo em que o meio é capaz de manter um microrganismo viável dependerá da cepa em questão. Por exemplo, para microrganismos do gênero Neisserias e Haemophilus eles podem permanecer viáveis ​​por até 24 horas, mas cepas como Salmonella ou Shigella podem durar dias e até semanas.

Se for estimado que o processamento da amostra pode demorar mais de 4 dias, é preferível congelar a amostra a -70 ° C.

Identificação da amostra no meio de transporte

O meio de transporte preparado ou a cultura comercial deve ter uma etiqueta onde serão colocadas as seguintes informações:

Nome e sobrenome do paciente: evite a confusão da amostra.

Número de identificação: É conveniente manter a ordem no trabalho.

Fonte de coleta de amostra: ajuda o bacteriologista a escolher o meio de cultura apropriado.

Médico assistente: Às vezes é necessário para possíveis consultas.

Data e hora da amostragem: É necessária a aceitação ou rejeição da amostra de acordo com o tempo decorrido entre a coleta da amostra e o recebimento no laboratório.

Outras informações que seriam muito úteis para anexar são:

O diagnóstico presuntivo: orienta na adição de meios de cultura especiais de acordo com a suspeita diagnóstica.

Tratamento com antibióticos: é útil anexá-lo ao antibiograma.

Todas essas informações são vitais para garantir o processamento adequado da amostra.

Controle de qualidade

Para avaliar o desempenho do meio Stuart, cepas conhecidas podem ser inoculadas e mantidas a 25 ° C, tais como: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.

Em todos os casos, espera-se a recuperação do microrganismo em questão, preservado por 24 horas.

Por outro lado, outras cepas podem ser utilizadas, tais como: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Escherichia coli ATCC 11775.

Em todos os casos, a recuperação abundante é esperada por até 96 horas.

Limitações

Alguns estudos garantem que o glicerofosfato presente no meio Stuart pode ser metabolizado por alguns coliformes, entre outras bactérias Gram negativas, e, portanto, se multiplicar neste meio.

Esse risco aumenta quanto mais tempo o processamento da amostra é atrasado. Da mesma forma, a exposição do meio Stuart a altas temperaturas durante o transporte influencia isso.

Referências

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