Agar XLD: justificativa, preparação e usos - Ciência - 2023

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Agar XLD: justificativa, preparação e usos - Ciência
Agar XLD: justificativa, preparação e usos - Ciência

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o Ágar XLD ou Xilose Lisina Desoxicolato Agar é um meio de cultura sólido seletivo e diferencial para o isolamento de enteropatógenos. Taylor projetou a fórmula do ágar XL (Xilose, Lisina) para melhorar o isolamento do gênero Shigella.

Ele observou que esse gênero foi inibido na maioria dos meios destinados ao isolamento de enteropatógenos. Posteriormente, foram adicionados desoxicolato de sódio, tiossulfato de sódio e citrato férrico de amônio para aumentar sua seletividade. Esta fórmula provou ser útil para o isolamento de Shigella e Salmonella.

O ágar XLD é composto de extrato de levedura, desoxicolato de sódio, xilose, lisina, lactose, sacarose, tiossulfato de sódio, citrato férrico de amônio, cloreto de sódio, vermelho de fenol e ágar. XLD Agar e SS Agar duo são usados ​​na maioria dos laboratórios de bacteriologia para estudar amostras fecais de Shigella e Salmonella.


Outros laboratórios preferem a combinação de CHROMagar Salmonella e ágar XLD, entre outras opções disponíveis. Esses duos podem ser preparados em placas de Petri duplas. De um lado colocam ágar XLD e do outro lado o outro meio escolhido.

Base

- Poder nutritivo

O ágar XLD contém extrato de levedura, que serve como fonte de nutrientes para os microrganismos que se desenvolvem neste ágar. Além disso, a presença de carboidratos (xilose, sacarose e lactose) fornecem energia às bactérias que podem fermentá-los.

-Seletividade do meio

Como substância inibidora, apresenta desoxicolato de sódio; Isso evita o crescimento de bactérias Gram positivas, tornando o meio seletivo.

-Poder diferencial

Colônias típicas de Shigella

Como já mencionado, o ágar XLD contém xilose; Este carboidrato é fermentado por todas as bactérias que crescem neste meio, com exceção do gênero Shigella.


Essa é uma das características que lhe conferem caráter diferencial, uma vez que as colônias de Shigella se diferenciam das demais pelo desenvolvimento de colônias vermelhas, enquanto as demais bactérias produzem colônias amarelas.

Colônias típicas de Salmonella

O gênero Salmonella também fermenta a xilose, gerando inicialmente colônias amarelas. No entanto, após esgotar o carboidrato xilose, ele ataca a lisina por sua enzima lisina descarboxilase. A descarboxilação da lisina gera álcalis que transformam a cor da colônia e do meio circundante no vermelho original.

Esse comportamento só é realizado pela Salmonella, uma vez que os coliformes que descarboxilam a lisina não conseguem alcalinizar o meio.Isso ocorre porque os coliformes também fermentam a lactose e a sacarose presentes; portanto, a produção de ácidos é muito alta, deixando a colônia amarela nessas bactérias.

Deve-se notar que o gênero Salmonella não fermenta sacarose ou lactose.


Produção de H2S

O ágar XLD também pode detectar espécies de Salmonella produtoras de H2S; Para isso, conta com a fonte de enxofre representada pelo tiossulfato de sódio e um revelador de reação que é o citrato férrico de amônio.

Este último reage com o H2S (gás incolor) e forma um precipitado preto visível insolúvel de sulfato de ferro. Nesse sentido, as características das colônias de salmonela serão vermelhas com o centro preto.

Deve-se notar que para a reação de formação de H2Sim, é necessário um pH alcalino. É por isso que outras Enterobacteriaceae que formam H2S não podem ou fazem mal neste meio, pois a alta acidez que produzem ao fermentar os carboidratos presentes inibe ou atrapalha a reação.

- Cloreto de sódio, ágar e vermelho de fenol

Finalmente, o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico; o ágar é o agente solidificante e o vermelho de fenol detecta alterações de pH, alterando a cor das colônias e do meio.

Preparação

Pesar 55 g de meio XLD desidratado e dissolver em 1 litro de água. Aquecer e mexer a mistura até atingir o ponto de ebulição. Não superaquecer, pois o calor danifica o meio e cria um precipitado que altera a morfologia das colônias típicas.

Este meio não deve ser autoclavado. Ao dissolver, deve ser passado para banho-maria a 50 ° C. Ao esfriar, sirva diretamente em placas de Petri esterilizadas. Eles podem ser derramados em pratos individuais ou duplos. Eles são deixados para solidificar e são armazenados na geladeira até o uso.

Temperar antes de usar. Por se tratar de um meio não estéril, recomenda-se prepará-lo próximo à data de uso.

O pH final do meio deve ser 7,4 ± 0,2. A cor do meio preparado é laranja-avermelhado, translúcido, sem precipitado.

Se você tiver ágar base Xilose Lisina (XL), poderá adicionar desoxicolato de sódio, tiossulfato de sódio e citrato de ferro amônio. Desta forma, a fórmula de ágar XLD é obtida.

Formulários

O ágar XLD é utilizado para a recuperação de enteropatógenos, principalmente do gênero Shigella e secundariamente do gênero Salmonella. É útil para avaliar amostras de fezes, água e alimentos.

Tipos de amostras

Fezes

Amostras de fezes podem ser semeadas diretamente em ágar XLD, fazendo uma boa distribuição do material para obtenção de colônias isoladas.

Para melhorar a recuperação de Salmonella, o ágar XLD pode ser cultivado a partir de meios de enriquecimento de Salmonella.

Comida

No caso de alimentos, podem ser usados ​​caldos de enriquecimento para Salmonella e Shigella. Para Salmonella, podem ser usados ​​caldos de selenito cistina, caldo de tetrationato verde brilhante, entre outros.

No caso da Shigella, pode ser enriquecido com caldo Shigella com 0,5 µ / ml de novobiocina, incubado a 42 ° ± 1 ° C durante 16-20 horas.

Água

Nas análises de água, recomenda-se a técnica de filtração por membrana e o uso de ágar XLD, entre outros.

Condições de plantio e identificação

O meio semeado é incubado aerobicamente a 35 ° C durante 24 a 48 horas.

São observadas as colônias típicas de cada gênero, as colônias suspeitas devem passar por testes bioquímicos para sua identificação.

Controle de qualidade

As seguintes cepas bacterianas podem ser usadas para avaliar o controle de qualidade do meio: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella Sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

O gênero Salmonella é caracterizado por apresentar neste meio colônias vermelhas com centro preto ou colônias completamente pretas. Já no gênero Shigella, as colônias devem ser vermelhas, ou seja, a cor do meio.

Em caso de Escherichia coli espera-se que seja total ou parcialmente inibido; se crescer, as colônias ficam amarelas. Para Proteus mirabilis crescimento pobre é esperado com colônias rosa com ou sem centro preto. Eventualmente, o gênero Klebsiella crescerá como colônias amarelas.

Pensamentos finais

O ágar XLD é amplamente utilizado em laboratórios de bacteriologia por sua alta eficiência na recuperação de Shigella e também por apresentar uma boa recuperação do gênero Salmonella.

Rall et al. (2005) em seu trabalho intitulado "Avaliação de três caldos de enriquecimento e cinco meios sólidos para a detecção de Salmonella em aves" demonstraram que dos 3 meios clássicos testados (ágar verde brilhante, ágar SS e ágar XLD) , O ágar XLD teve a melhor taxa de recuperação.

As percentagens de recuperação foram as seguintes: 13,8% para ágar verde brilhante, 27,6% para SS e 34,5% para XLD. O ágar Rambach com 48% de recuperação e o CHROMagar com 79,3% foram superados apenas pelos meios cromogênicos.

Referências

  1. Doenças transmitidas por alimentos. Shigelose. Disponível em: anmat.gov.ar
  2. "Agar XLD."Wikipédia, a enciclopédia livre. 9 de fevereiro de 2019, 11h46 UTC. 10 de abril de 2019, 19:25 wikipedia.org
  3. BBL Laboratories. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Disponível em: bd.com
  4. Lab. Neogen. Ágar XLD. Disponível em: foodsafety.neogen
  5. Laboratório Francisco Soria Melguizo. Agar XLD. Disponível em: http://f-soria.es/Inform
  6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Avaliação de três caldos de enriquecimento e cinco meios de plaqueamento para detecção de Salmonella em aves. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Disponível em: scielo.br
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.