Água peptonada: justificativa, preparação e usos - Ciência - 2023

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o água peptonada É um meio de enriquecimento líquido não seletivo, usado principalmente como diluente para amostras de alimentos ou outros materiais. Este meio do ponto de vista químico é muito simples, contém peptona de carne, cloreto de sódio e água.

Tem um certo valor nutricional, permitindo enriquecer a amostra. Se houver abuso de bactérias, este meio tem o poder de reparar a viabilidade. É especialmente útil na recuperação de bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae.

No caso da recuperação de Salmonelas, recomenda-se o uso da variante da água peptonada tamponada; Isso serve como meio de pré-enriquecimento da amostra, neste caso contém outros elementos como fosfato dissódico e fosfato dipotássico.

Normalmente a água peptonada é preparada em pH neutro, no entanto, existem outras variantes onde é necessário que o pH seja 8,5 ± 0,2 (alcalino), porque a bactéria a ser isolada é alcalifílica, como a Vibrio cholerae.

Além disso, este meio pode ser usado como meio de base para testes de fermentação de carboidratos.

Base

Peptonas fornecem os nutrientes necessários para o crescimento bacteriano, especialmente nitrogênio e aminoácidos de cadeia curta, enquanto o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico.

Além disso, o meio permite dispersar, homogeneizar e reparar células bacterianas danificadas por processos industriais.

Como diluente é ideal, substituindo efetivamente a solução fisiológica (SSF) ou a solução tampão de fosfato (PBS).

O crescimento bacteriano é evidente pela observação de sua turbidez.

Preparação

Preparação caseira (não comercial)

Pesar 1 g de peptona e 8,5 g de cloreto de sódio, dissolver em 1 litro de água destilada. O pH deve ser ajustado para 7,0. Para isso, pode ser usado cloreto de sódio 1N.

Preparação usando meio comercial

Pesar 15 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Homogeneizar a mistura. Se necessário, a mistura é fervida por 1 minuto para auxiliar na dissolução total. Sirva em frascos de 100 ml ou tubos de 10 ml, conforme necessário. Autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Resfrie e use ou guarde na geladeira. O pH final do meio é 7,2 ± 0,2.

A cor do meio desidratado é bege claro e o meio preparado é âmbar claro.

Preparação para testes de fermentação

Ao preparo prévio - antes da esterilização - deve-se adicionar o carboidrato na concentração final de 1%, mais o indicador Andrade (fucsina ácida) ou vermelho de fenol (0,018 g / L). Os tubos devem ser equipados com um sino Durham para observar a formação de gás.

Outras variantes de água peptonada

- Água peptonada tamponada ou tamponada

Contém hidrolisado enzimático de caseína, cloreto de sódio, fosfato di-hidrogenado de potássio e hidrogenofosfato de sódio dodeca-hidratado. O pH final é 7,0 ± 0,2.

Para a sua preparação pesar 20 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. Deixe descansar por aproximadamente 5 minutos. Aquecer por 1 minuto até dissolver completamente.

Despeje em potes adequados, conforme necessário. Esterilize usando autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

- Água peptonada alcalina

Pesar 25 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água. Proceda conforme descrito acima. O pH varia de 8,3 a 8,7.

Usar

O inóculo é feito colocando a amostra diretamente.

É usado para diluir amostras, especialmente quando há suspeita de que possam haver bactérias danificadas. Normalmente, as diluições são 1:10 e 1: 100.

Incubar por 24 horas em aerobiose a 35-37 ° C.

Amostras de fezes

Para amostras de fezes para Salmonella, o uso de água tamponada ou tamponada é recomendado como meio de pré-enriquecimento.

Para fazer isso, proceda da seguinte forma:

Se houver formação de fezes, pegue 1 g de amostra. Se forem líquidos, pegue 1 ml de fezes e suspenda em um tubo com 10 ml de água peptonada triturada. No caso de esfregaços retais, descarte o material contido no esfregaço no tubo com água peptonada tamponada.

Em todos os casos, misture e homogeneize muito bem a amostra.

Incubar a 37 ° C por 18 a 24 horas. Subseqüentemente, subcultura em um caldo de enriquecimento, como caldo de selenita cistina ou caldo de tetrationato a 37 ° C por mais 18-24 horas. Por fim, cultivar em meios seletivos para Salmonella, como ágar SS, ágar XLD, ágar Hektoen, entre outros.

Amostras de alimentos

Água peptonada é usada como meio de enriquecimento ou como diluente simples, mas se forem procuradas espécies de Salmonella, ela é usada como meio de pré-enriquecimento, conforme já descrito.

Na alimentação, proceda da seguinte forma:

Para alimentos sólidos pesar 25 g da amostra e para alimentos líquidos medir 25 ml. Coloque a referida porção em frascos contendo 225 ml de água peptonada. Misture e homogeneize a amostra.

Se houver suspeita de carga microbiana elevada, podem ser feitas diluições em série ou decimais para facilitar a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC).

O número de diluições dependerá do tipo de amostra e da experiência do analista.

Se, por outro lado, houver suspeita de que a carga microbiana seja muito baixa, nenhuma diluição será necessária. Posteriormente, subcultura em meio seletivo.

No caso dos alimentos do mar, como mariscos, peixes, entre outros, em busca de Vibrio cholerae ou outras espécies de Vibrio, água peptonada ajustada para pH 8,5 (água peptonada alcalina) deve ser usada.

Controle de qualidade

De cada lote preparado, um a dois tubos devem ser incubados sem inoculação por 24 horas em aerobiose a 37 ° C. No final do tempo, nenhuma turbidez ou mudança de cor deve ser observada.

As cepas de controle conhecidas também podem ser usadas para avaliar sua eficácia:

As seguintes cepas bacterianas podem ser usadas para isso: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Em todos os casos, espera-se um desenvolvimento microbiano satisfatório, observado pela turbidez do meio.

Limitações

-O meio desidratado é muito higroscópico, por isso deve ser mantido longe da umidade.

-O meio não deve ser usado se for observado qualquer tipo de deterioração.

- O meio de cultura desidratado deve ser armazenado entre 10 - 35 ° C

-O meio preparado deve ser mantido refrigerado (2-8 ° C).

Referências

Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B e Velázquez O. Técnicas de Análise Microbiológica de Alimentos. 2009, 2ª ed. Faculdade de Química da UNAM. México. Versão para Administrador de Manuais e Documentos (AMyD) da Faculdade de Química da UNAM 1. Disponível em: http://depa.fquim.unam.mx
Britannia Laboratories. Água peptonada tamponada. 2015. Disponível em: britanialab.com
Neogen Laboratories. Água peptonada. Disponível em: foodsafety.neogen.com
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Merck Laboratories. Água peptonada tamponada. Disponível em: merckmillipore.com
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Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.