Agar de esculina biliar: justificativa, preparação e usos - Ciência - 2023

Contente

o bile esculina agar É um meio de cultura sólido seletivo e diferencial. É usado como um teste diagnóstico para determinar a capacidade de um determinado microrganismo de crescer em um meio contendo bile e também quebrar o glicosídeo esculina em esculetina e glicose.

Este teste diagnóstico é utilizado para diferenciar espécies do gênero Streptococcus pertencentes ao grupo D (bile esculina positiva), de outros grupos de Streptococcus que reagem negativamente a este teste.

Deve-se destacar que alguns Streptococcus do grupo viridans podem hidrolisar esculina, mas não são capazes de crescer na presença de bile na concentração de 40%, portanto, neste meio a reação para este grupo é negativa.

Por outro lado, o meio de esculina biliar também é útil para o diagnóstico de Listeria monocytogenes ou espécies de Aerococcus spvisto que esses microrganismos são bile esculina positivos.

O ágar bile Esculin é composto de peptona, extrato de carne, bile de boi, esculina, citrato de ferro, ágar e água destilada. Algumas casas comerciais incluem azida de sódio na composição do meio.

O meio pode ser preparado em laboratório se você tiver todos os compostos separadamente ou pode ser preparado a partir do meio desidratado comercial.

Base

O meio de esculina biliar contém peptonas e extrato de carne, ambos os compostos fornecem os nutrientes necessários para o crescimento de microrganismos.

Ele também contém esculina; Este composto é um glicosídeo formado pela união de um monossacarídeo simples (glicose) com um composto denominado 6,7-di-hidroxicumarina ou esculetina (aglucona), ligado por uma ligação acetal ou glucosídica.

O teste é baseado em mostrar se a bactéria é capaz de hidrolisar esculina. Se isso ocorrer, a esculina se decompõe em esculetina e glicose. A Esculetina reage com o ferro presente no meio, formando um composto marrom escuro, quase preto.

Isso significa que o citrato férrico atua como um revelador de reação. Esta característica torna o Bile Esculin Agar um meio diferencial.

Por sua vez, a bile é um inibidor que impede o crescimento de alguns microrganismos, portanto, a bactéria, antes de partir a esculina, deve ser capaz de crescer na presença da bile. Portanto, este meio é considerado seletivo.

As bactérias que podem se desenvolver neste ambiente são principalmente aquelas que vivem no ambiente intestinal.

Nesse sentido, algumas empresas comerciais adicionam azida sódica ao meio para inibir ainda mais o crescimento de bacilos Gram negativos entéricos, aumentando a seletividade do meio para o crescimento de Streptococcus.

Por fim, o ágar confere consistência sólida ao meio e a água é o solvente dos compostos.

Preparação

Preparação caseira de ágar esculina biliar

Pesar:

5 g de peptonas

3 g de extrato de carne

40 g de bile de boi

1 g de esculina

0,5 g de citrato de ferro

15 g de ágar

1000 ml de água destilada

No caso de adição de azida de sódio, 0,25 g / litro é pesado e adicionado à mistura.

Dissolva os componentes no litro de água destilada, aqueça até que os compostos estejam completamente dissolvidos. Distribua 5 ml em tubos de ensaio com tampa de rosca de 16 x 125 mm. Autoclave a 121 ° C, 15 libras de pressão por 15 minutos.

Retire da autoclave e incline os tubos sobre um suporte, para que o ágar se solidifique em bico largo.

Guarde na geladeira até o uso. Deixe atingir a temperatura ambiente antes de semear.

As placas de ágar esculina biliar também podem ser preparadas; neste caso, toda a mistura é autoclavada em um frasco e posteriormente distribuída em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar e guarde na geladeira.

O pH do meio deve ser 6,6 ± 0,2.

Preparação de ágar esculina biliar a partir de um meio comercial

Pese a quantidade especificada pelo encarte. Isso pode variar de uma empresa para outra. Em seguida, proceda da mesma forma que o procedimento explicado acima.

O pH do meio deve ser 6,6 ± 0,2. A cor do meio desidratado é bege claro e o meio preparado é âmbar escuro.

Formulários

O meio de esculina biliar é usado principalmente para diferenciar estreptococos do grupo D (bile esculina positivo), do resto dos grupos de estreptococos (bile esculina negativo).

Combinando o teste de crescimento em caldo hipersal com o teste de esculina biliar, um grupo especial de Streptococcus do grupo D chamado Enterococcus pode ser identificado.

Este grupo especial de Streptococcus pertence ao grupo D do gênero mencionado e são capazes de hidrolisar esculina na presença de bile, assim como o resto dos membros do grupo D, mas também são capazes de se desenvolver em meio hipersal (BHI com cloreto de 6,5% de sódio), propriedade que faz a diferença.

Portanto, os estreptococos que hidrolisam a bile da esculina, mas não crescem em caldo hipersal, são chamados de estreptococos do grupo D não enterococos.

Semeado

Inocular o meio de preferência com caldo puro de 24 horas de Todd-Hewitt.

Adicione 2 gotas na superfície do meio com uma pipeta Pasteur e espalhe no meio com um loop de platina.

Incubar a 35 ° C por 48 horas, enquanto o tempo de incubação é cumprido, pode ser monitorado para ver se há uma reação positiva. Se ao final do tempo a reação ainda for negativa, pode-se incubar por até 72 horas.

Interpretação

Reação positiva: Aspecto de cor castanha escura, quase preta, no bico da flauta (no caso do ensaio em tubo) ou escurecimento do ágar à volta das colónias (no caso do ensaio em placa).

Reação negativa: nenhum escurecimento do meio ou preto aparece em menos da metade do tubo após 72 horas de incubação. Por outro lado, o crescimento bacteriano no meio sem o aparecimento da cor preta deve ser considerado um teste negativo.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do meio, uma cepa de Enterococcus faecalis ATCC 29212 como um controle positivo e uma cepa Streptocococus não pertencente ao grupo D como um controle negativo.

Limitações

-Os meios que não contêm azida sódica permitem o crescimento de bacilos Gram negativos entéricos. Alguns deles podem escurecer o meio.

- Algumas casas comerciais adicionam baixa concentração de bile (10%) e por isso alguns Streptococcus que não pertencem ao grupo D podem se desenvolver no meio e hidrolisar esculina, o que pode gerar erros de interpretação.

Referências

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