Caldo de tripticaseína de soja: base, preparação e usos - Ciência - 2023

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o caldo de soja tríptico É um meio de cultura líquido, altamente nutritivo e não seletivo. Por sua grande versatilidade, é um dos meios de cultura líquidos mais utilizados no laboratório de microbiologia.

É também conhecido pelo nome de caldo de tripticase soja ou caseína-soja digerida, cuja abreviatura é TSB por sua sigla em inglês. Tryptic am Caldo ou CST por sua sigla em espanhol. Seus usos são muito variados devido à sua composição. É composto de tripteína, peptona de soja, cloreto de sódio, fosfato dipotássico e glicose.

É capaz de reproduzir bactérias patogênicas clinicamente importantes, incluindo aquelas que são nutricionalmente exigentes e bactérias anaeróbias. Alguns fungos oportunistas e contaminantes também podem se desenvolver neste ambiente.

Devido ao seu alto poder nutricional, possui alta sensibilidade para detectar contaminação microbiana, por isso foi escolhido pelo Serviço de Inspeção de Sanidade Animal e Vegetal do USDA para a análise microbiológica de vacinas.

Da mesma forma, o caldo tripticaseína soja atende aos requisitos das diferentes farmacopéias (EP europeia, JP japonesa e USP norte-americana) para o estudo microbiológico de produtos em nível industrial, como cosméticos e alimentos.

Por outro lado, vale ressaltar que apesar de sua grande utilidade, esse meio é relativamente barato, tornando-o acessível para a maioria dos laboratórios de microbiologia. Também é muito fácil de preparar.

Base

Tripteína, peptona e glicose fornecem propriedades nutricionais essenciais para torná-lo um meio ideal para o crescimento microbiano rápido.

Em aproximadamente 6 a 8 horas de incubação, o crescimento já pode ser visto na maioria dos microrganismos. No entanto, existem cepas de crescimento lento que podem levar dias para crescer.

O cloreto de sódio e o fosfato dipotássico atuam como equilíbrio osmótico e regulador de pH, respectivamente. A presença de crescimento é evidenciada pelo aparecimento de turbidez no meio; se não houver crescimento, o meio permanece translúcido.

Pela sua coloração clara é possível observar a produção de pigmentos, como o mostrado na imagem localizada no início do artigo, que corresponde ao pigmento produzido pela Pseudomonas aeruginosa.

Preparação

-Tripticasein caldo de soja

Para preparar o caldo tripticase soja, 30 g de meio comercial desidratado devem ser pesados em balança digital. Em seguida, é dissolvido em um litro de água destilada contida em um frasco.

A mistura é deixada em repouso por 5 minutos e posteriormente levada a uma fonte de calor para auxiliar na dissolução do meio. Deve ser mexido freqüentemente enquanto fervura por 1 minuto.

Uma vez dissolvido, é distribuído em tubos de tamanho apropriado, conforme necessário. Podem ser usados tubos com tampões de algodão ou tampas de baquelite. Posteriormente, os tubos são esterilizados com o meio em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

O pH do meio deve permanecer em 7,3 ± 0,2

Ressalta-se que a cor do meio de cultura desidratado é bege claro e deve ser armazenado entre 10 a 35 ° C, em local seco. Já o caldo preparado é de cor âmbar claro e deve ser conservado no refrigerador (2 a 8 ° C).

-Variantes de caldo de tripticaseína de soja

O caldo de tripticaseína de soja modificada pode ser preparado pela adição de sais biliares e novobiocina para torná-lo seletivo para o isolamento deE. coli.Outra opção com o mesmo propósito é preparar caldo tripticase soja suplementado com vancomicina, cefixima e telurito (2,5 µg / ml).

Por outro lado, mais glicose (0,25%) pode ser adicionada ao caldo de soja tríptica quando o objetivo é estimular a formação de biofilmes.

Usar

É nutritivo o suficiente para permitir o crescimento de bactérias fastidiosas ou fastidiosas, como Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp e Brucella sp, sem a necessidade de suplementação com sangue ou soro.

Da mesma forma, alguns fungos podem se desenvolver neste caldo, como Complexo de Candida albicans, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Além disso, este meio em condições anaeróbias é ideal para recuperar bactérias pertencentes ao gênero Clostridium, bem como bactérias anaeróbias não esporuladas de importância clínica.

Se for adicionado cloreto de sódio a 6,5%, ele pode ser usado para o crescimento de Enterococcus e outros Streptococcus do Grupo D.

Em nível de pesquisa, tem sido muito útil em vários protocolos, especialmente no estudo de biofilme ou bactérias formadoras de biofilme. Também é usado para preparar a suspensão bacteriana de Mac Farland 0,5% necessária para a realização do antibiograma pelo método de Kirby e Bauer.

Neste caso, 3 a 5 colônias de aparência semelhante são retiradas e emulsionadas em 4-5 ml de caldo de tripticaseína de soja. É então incubado por 2 a 6 horas a 35-37 ° C e subsequentemente ajustado para a concentração desejada usando solução salina estéril. Caldos de tripticaseína de soja não devem ser usados de 18 a 24 horas de incubação.

Semeado

A amostra pode ser semeada diretamente ou colônias puras retiradas de meios seletivos podem ser subcultivadas. O inóculo deve ser pequeno para não turvar o meio antes da incubação.

Normalmente é incubado a 37 ° C em aerobiose por 24 horas, mas essas condições podem variar dependendo do microrganismo procurado. Também pode ser incubado em condições anaeróbicas a 37 ° C por vários dias, se necessário. Por exemplo, em microrganismos fastidiosos ou de crescimento lento, ele pode ser incubado por até 7 dias.

Na análise microbiológica de fármacos - como vacinas - os protocolos são mais rígidos. Nestes casos, o caldo sem crescimento não é descartado até atingir 14 dias de incubação contínua.

Controle de qualidade

De cada lote preparado, 1 ou 2 tubos não inoculados devem ser incubados para demonstrar sua esterilidade. Deve permanecer inalterado.

Cepas conhecidas também podem ser plantadas para avaliar seu comportamento.Entre as cepas que podem ser utilizadas estão:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604,Candida albicans ATCC 10231,Bacillus subtilis ATCC 6633,Staphylococcus aureus ATCC 6538 ou 25923,Escherichia coli ATCC 8739,Streptococcus pyogenes ATCC 19615,Streptococcus pneumoniae ATCC 6305,Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027,Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório nas condições adequadas de atmosfera e temperatura para cada microrganismo.

Limitações

-A fermentação da glicose provoca diminuição do pH do meio devido à produção de ácidos. Isso pode ser desfavorável para a sobrevivência de alguns microrganismos sensíveis à acidez.

-Não é recomendado para a manutenção de cepas, pois além da acidez, as bactérias esgotam os nutrientes após alguns dias com o conseqüente acúmulo de substâncias tóxicas que tornam o ambiente inóspito.

-Você deve trabalhar cuidando de todos os protocolos de esterilidade, pois os caldos são facilmente contaminados.

-Após preparar caldos de tripticaseína de soja, não se deve tentar transferir o caldo para outro tubo estéril, pois esse tipo de manobra é muito vulnerável à contaminação.

Referências

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