Orcein: fundação e preparação - Ciência - 2023

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o orceína É um corante púrpura natural, extraído de vários líquenes como: orquídea ou urchila, líquen frutico, Rocella Tinctoria Y Lecanora parella principalmente. o Rocella Tinctoria É encontrada no continente africano e americano, embora possa ser substituída por outras espécies localizadas na Europa.

Esta mancha tem sido amplamente utilizada em estudos citogenéticos desde os tempos antigos. Neste sentido, a preparação da orceína que inclui ácido acético foi introduzida pela LaCourt em 1941, razão pela qual foi inicialmente designada por técnica LaCourt.

Da mesma forma, por sua simplicidade e baixo custo, tem sido utilizado na fabricação de tornassol (corante extraído de líquenes) e em estudos histológicos (coloração de células e tecidos).

Vários estudos usaram esta mancha combinada com outros produtos químicos, como picrocarminato de amônia e ácido acético, para colorir fibras elásticas e cromossomos respectivamente. Atualmente, a orceína continua a ser usada nos estudos citogenéticos de animais e plantas.

Recentemente, Silva et al. 2017 usou com sucesso esta mancha para observar as várias mudanças que ocorrem nas fibras elásticas da pele do polegar em idosos chilenos. Este estudo revelou como as fibras do polegar se alteram com o envelhecimento.

Nesse sentido, observou-se que as fibras elásticas apresentam coloração preto-acastanhada em indivíduos com mais de 80 anos; enquanto nos mais novos (a partir dos 60 anos) são apreciados castanhos avermelhados. O citoplasma e outras estruturas celulares tornam-se verde-amarelados.

Isso permitiu corroborar a presença e o estado das fibras elásticas, quanto à sua disposição, quantidade e integridade. Por outro lado, também foi apontado que a orceína é de grande ajuda na identificação de aneurismas e no diagnóstico de arterite, entre outras condições.

Base

A orceína faz parte do grupo de corantes oxazina e a coloração é baseada em sua afinidade pelo DNA. O corante se liga à carga negativa dessa molécula, representada pelo grupo fosfato. É por isso que os cromossomos ficam roxos.

No entanto, o resto das estruturas celulares assumem uma cor diferente. Especificamente, no caso das fibras elásticas, elas são de cor marrom-avermelhada, núcleos celulares de azul a violeta escuro, enquanto o colágeno não mancha.

Por esse motivo, a orceína é usada para tingir a cromatina e diferenciar o sexo em algumas espécies de moscas. Da mesma forma, os núcleos e algumas inclusões hepáticas produzidas pelos antígenos da hepatite B podem ser corados.

As soluções de orceína têm funções específicas na coloração. A orceína A tem a função de amolecer as membranas celulares, causando sua morte e paralisando o processo de sua divisão. Enquanto isso, a orceína B é responsável por completar a coloração por sua adesão aos cromossomos.

Preparação

Solução de aceto-orceína 1%

Para preparar uma solução a 1% de aceto-orceína, 2 gramas de orceína são dissolvidos em 45 ml de ácido acético glacial, preferencialmente quente, e 55 ml de água destilada são adicionados à temperatura ambiente.

Em seguida, é constantemente misturado para homogeneizar a solução, para depois deixá-la descansar até que esfrie. Por fim, é armazenado a 4ºC em potes escuros. Esta preparação foi utilizada pela Flores 2012, para observar as fases de maturação de oócitos de vaca.

Neste caso, por exemplo, a solução de aceto-orceína é colocada sobre o tecido previamente fixado em ácido acético-etanol por 24 horas. Este processo de coloração é realizado por 30 minutos e o tecido é posteriormente descolorido.

Da mesma forma, pode ser usado na identificação de organelas em tecidos multicelulares. Nesse caso, um esfregaço da mucosa bucal é corado com uma gota da solução de aceto-orceína, a lamínula é colocada na lâmina e o núcleo da célula com suas subestruturas pode ser observado imediatamente.

Solução lacto-propônica orceína 1%

Além disso, a orceína pode ser preparada com outros produtos químicos, como ácido lático e ácido propiônico. Para fazer isso, um grama de orceína é dissolvido em uma solução pré-misturada à temperatura ambiente de 23 ml de ácido láctico e 23 ml de ácido propiônico; completando o volume com água destilada até 100 ml.

Com esta solução de orceína lacto-propiônica você pode observar as diferentes fases da divisão meiótica das células vegetais. Nesse caso, a amostra pré-fixada e hidrolisada é colocada por 15 minutos na solução de orceína lacto-propiônica e, em seguida, o tecido é espalhado em lâminas de microscópio.

No estudo de 2016 de Duque sobre cromossomos de politeno, ele usou uma preparação de 2 gramas de orceína diluída em ácido acético e 85% de ácido lático, diluindo com uma solução de ácido acético a 65%. Finalmente, ele olhou para os cromossomos nas glândulas salivares do Drosophila melanogaster.

Orcein A e Orcein B

É importante observar que dependendo da amostra e do que será avaliado, a solução de orceína apropriada é preparada. Assim, por exemplo, ácido clorídrico 1 N é adicionado à solução de orceína A para observar as células em divisão.

Enquanto a solução de orceína B é dissolvida em ácido acético a 45%. Esta técnica é um método abreviado de coloração e geralmente é usada como um complemento para a coloração de estruturas cromossômicas.

Pensamentos finais

Há séculos, em países do continente americano, como a Argentina, é possível obter líquenes como: Lecanora, Parmelia Y Umbilicaria, que são grandes fontes de orceína. Também áreas europeias, como as Ilhas Canárias, eram na época grandes produtoras da orquídea.

Este foi exportado para outras cidades deste mesmo continente, como Gênova e países como a Inglaterra, enquanto a Holanda monopolizou a fabricação de tornassol da orquila. Então, mais tarde, esse líquen foi reduzido até que estava prestes a se extinguir.

Isso fez com que a orquídea fosse substituída por outras plantas com propriedades corantes. No entanto, o surgimento de corantes sintéticos contribuiu para o encerramento do comércio desse líquen fonte de orceína.

Isso foi possível graças a Cocq, que em 1812 descreveu a síntese da orceína, sabendo então que ela é sintetizada por um composto fenólico denominado orcinol. No entanto, apesar disso, a orceína natural ainda é a preferida hoje.

Isso pode ser porque o orcinol é um composto de cheiro muito forte e a exposição prolongada do que pode acarretar riscos à saúde, como a perda da capacidade de detectar odores. Esses danos à hipófise podem ir de temporários a permanentes quanto maior for a exposição.

Referências

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