Isolamento de microrganismos: técnicas e importância - Ciência - 2023

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o isolamento de microorganismos envolve um conjunto de técnicas usadas para extrair e separar as espécies de micróbios de interesse de seu habitat natural para um habitat em vitro. Essas técnicas são um conjunto de muitas ferramentas básicas e necessárias para estudos microbiológicos.

A maioria dos microrganismos conhecidos e definidos pela ciência são aqueles que foram isolados e mantidos em recipientes que simulam, em parte, as condições intrínsecas dos locais onde vivem.

Talvez um dos primeiros homens a praticar o isolamento de microrganismos foi Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723), que coletou e isolou amostras de micróbios de um grande número de lugares e ecossistemas para observá-los cuidadosamente sob as centenas de microscópios que projetou. .

No entanto, foi apenas na época dos cientistas Louis Pasteur e Robert Koch, ao longo do século XIX, que começaram a ser realizadas práticas rigorosas que serviam para o isolamento de microrganismos específicos, tudo para poder estudá-los detalhadamente. .

Ao contrário de Leeuwenhoek, esses pesquisadores se concentraram em isolar espécies definidas de outras espécies de micróbios do ambiente. Além disso, eles estavam interessados em mantê-los vivos o maior tempo possível fora de seu ambiente natural.

Hoje, técnicas precisas foram desenvolvidas para o isolamento e crescimento de muitos microrganismos diferentes obtidos de quase qualquer ambiente acima da biosfera.

Técnicas de isolamento de microorganismos

Todos os isolamentos de microrganismos começam com a coleta de uma amostra na natureza onde os microrganismos de interesse são encontrados. Esses locais podem ser feridas em tecidos animais ou vegetais, solos ou substratos, poças, mares, superfícies como pele, etc.

A amostra é retirada tocando ou apoiando um recipiente que possui um meio com os requisitos adequados para o crescimento de microrganismos na superfície da qual se deseja isolar. Neste recipiente você obterá o que é conhecido como "cultura" de micróbios.

Geralmente, a primeira safra a ser obtida em habitats naturais é, sem dúvida, uma “cultura mista”, ou seja, aquela que é composta por um grande número de diferentes espécies de micróbios.

Porém, a maioria das espécies de microrganismos podem ser isoladas umas das outras em laboratório, buscando obter culturas de microrganismos onde crescem apenas as espécies de interesse ou, em outras palavras, obtendo “culturas puras”.

Em essência, o processo que se realiza para obter "culturas puras" é conhecido como "isolamento de microrganismos".

Existem inúmeras técnicas de isolamento de microrganismos, existindo inclusive algumas específicas para um determinado tipo de microrganismo em particular. Em outros casos, é possível obter uma cultura pura apenas coletando a amostra no ambiente natural.

Entre as técnicas de isolamento mais utilizadas para separar uma espécie de interesse encontrada em meios de cultura mistos estão:

Arranhões ou riscos

Talvez este seja o método mais amplamente usado para isolar microrganismos. Essa técnica consiste em preparar um meio sólido estéril com todos os compostos nutricionais necessários ao crescimento do microrganismo em um recipiente de vidro, como uma placa de Petri.

Utilizando um instrumento fino, geralmente pontiagudo, o microrganismo a ser isolado na cultura mista é tocado, em seguida, no meio sólido estéril, a ponta do instrumento com o qual o microrganismo foi tocado começa a deslizar de um lado para o outro por todo o placa de carro.

Isso é feito intensamente para a frente e para trás ao longo da superfície do meio sólido ou agarizado, como se fosse um zigue-zague. Geralmente é feito até que cerca de um terço do diâmetro do ágar na placa seja coberto.

Fusão com o meio ou revestimento

Para este método, uma diluição do meio onde vivem os micróbios coletados é realizada até o ponto em que apenas algumas centenas de células permanecem para cada mililitro do meio onde foram diluídas.

Desta diluição são retirados alguns mililitros e misturados com o meio que será adicionado ao recipiente antes de solidificar. Por se misturarem o meio agarizado com o meio líquido onde se encontram os microrganismos, estes permanecem imersos no meio e só são visíveis até proliferarem como colônia.

Ao se desenvolver como uma colônia, é mais fácil separá-los do resto dos microrganismos com outros métodos, como arranhar, por exemplo.

Diluições em série

Este método consiste em fazer diluições seriadas do meio onde se encontram os microrganismos. Um exemplo disso são as diluições que são feitas para purificar Lactococcus lactis ou Lactobacillus acidophilus, bactéria responsável pela produção de queijo e iogurte.

Aproximadamente 1 mililitro é retirado de um tubo contendo leite azedo ou iogurte previamente fermentado e este mililitro é inoculado em leite estéril sem microorganismos. Mais tarde, cerca de um mililitro do dito leite é retirado e o processo é repetido.

Isso é repetido cerca de três ou quatro vezes em uma linha, o que é muito provável que obtenha Lactococcus lactis ou Lactobacillus acidophilus em um meio isolado de contaminantes que podem representar outros micróbios.

Procedimento de enriquecimento

Essa metodologia é alcançada pelo crescimento dos microrganismos em meios de cultura em condições que estimulem ou facilitem o crescimento da espécie de interesse e, em muitos casos, em condições que inibam o crescimento de outros microrganismos contaminantes.

Bactérias do gênero Salmonella Eles crescem em meios de cultura enriquecidos com selenito, uma vez que esses microrganismos transformam o selenito em selênio para metabolizá-lo. O selenito no meio torna difícil assimilar os nutrientes para microrganismos que não sejam salmonelas.

Técnica única ou exclusiva

Talvez esta seja a técnica mais difícil e menos eficaz para isolar micróbios. Trata-se de colocar uma gota do meio (amostra) onde os microrganismos estão alojados em uma lamela estéril e, em seguida, colocá-lo no palco do microscópio.

Posteriormente, durante a observação, uma única célula é removida com a ajuda de uma micropipeta estéril. A gota é colocada em outra lamínula estéril que é incubada na temperatura apropriada para o microrganismo. Finalmente, ele é observado novamente sob o microscópio para mostrar crescimento.

Se novas células se desenvolveram a partir de uma única célula obtida na re-observação, elas são adicionadas ao meio de cultura estéril para obter uma cultura pura totalmente isolada.

Técnicas personalizadas

Existem inúmeros micróbios diferentes no planeta Terra que estão espalhados por quase todos os ecossistemas conhecidos. Alguns microrganismos são conhecidos como Extremófilos e requerem condições únicas para seu desenvolvimento e crescimento.

Essas condições extremas são vantajosas e desvantajosas para o isolamento, pois, embora só permitam o crescimento desses microrganismos, podem ser difíceis de recriar. em vitro.

Importância

O isolamento de microrganismos tem representado um dos avanços mais importantes para a área da ciência e da medicina. Isso permitiu à humanidade estudar e desenvolver tratamentos eficazes contra diferentes patógenos microbianos.

Atualmente, sabe-se com certeza que os microrganismos formam parte essencial de todos os ecossistemas, portanto, conseguir o isolamento de alguns deles com relativa importância para o homem permite que os pesquisadores os estudem intensamente, a fim de compreendê-los em profundidade. seu papel em cada ecossistema.

Referências

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