Agar Czapek: base, preparação, usos e limitações - Ciência - 2023

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o Ágar czapek (CZA) é um meio de cultura sólido seletivo especialmente desenvolvido para o cultivo de bactérias e fungos saprofíticos. Foi criado pelo botânico Friedrich Johann Franz Czapek, de origem polonesa, e pelo químico americano Arthur Wayland Dox; portanto, este ágar também é conhecido como meio Czapek-Dox.

O meio original era líquido, mas o ágar foi adicionado posteriormente para torná-lo um meio sólido. O meio Czapek é composto de nitrato de sódio, fosfato dipotássico, sulfato de magnésio, cloreto de potássio, sulfato ferroso, sacarose, ágar e água destilada.

O pH do ágar Czapek é 7,3, mas há uma variante à qual é adicionado ácido lático a 10%, cujo pH permanece em 3,5. Este meio ácido é usado para o cultivo de microrganismos acidofílicos.

Por outro lado, algumas casas comerciais modificaram a composição do ágar Czapek trocando o sulfato de magnésio e o fosfato bipotássico por glicerofosfato; esta modificação evita a formação do precipitado de fosfato de magnésio observado com a fórmula convencional. Da mesma forma, existe outra variante à qual o extrato de levedura é adicionado.

Finalmente, o ágar Czapek é recomendado pela American Public Health Association APHA para o estudo de Actinomicetos sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp Y Penicillium sp. Essas espécies são caracterizadas por serem microrganismos ambientais e patógenos oportunistas.

Base

Este meio contém sacarose; Este carboidrato serve como fonte de carbono, enquanto o nitrato de sódio é a fonte de nitrogênio, mas ao contrário de outros meios, o nitrogênio fornecido é inorgânico.

Por esse motivo, o meio Czapek é considerado seletivo, uma vez que somente podem crescer microrganismos capazes de utilizar compostos inorgânicos como única fonte de nitrogênio.

Como regulador da osmolaridade do meio está o fosfato bipotássico. Por sua vez, o sulfato de magnésio, o cloreto de potássio e o sulfato ferroso fornecem minerais essenciais para o crescimento de microorganismos saprofíticos (de vida livre). Esta fórmula forma um precipitado de fosfato de magnésio.

Por fim, o ágar-ágar é o composto que confere consistência sólida ao meio e a água é o solvente de todos os componentes.

Com a fórmula de ágar Czapek modificada, não há formação de precipitado e melhora o desempenho de crescimento de alguns fungos.

A extrema acidez do Ágar Ácido Czapek o torna um meio mais seletivo, permitindo apenas o crescimento de microrganismos acidofílicos, capazes de utilizar nitrogênio inorgânico. Enquanto isso, o ágar de levedura Czapek melhora o desempenho de certos cogumelos.

Preparação

Czapek-Dox médio

Pesar 49 g do meio de cultura desidratado e dissolver em água destilada. Aplique fogo até ferver. Agite a mistura com freqüência até que esteja completamente dissolvido.

- Cunhas de Agar Zapek

Distribuir a mistura dissolvida em tubos e autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Ao retirar da autoclave, homogeneizar antes de deitar os tubos e deixar solidificar.

- Placas de ágar Zapek

Autoclave a mistura dissolvida a 121 ° C por 15 minutos e deixe esfriar a 50 ° C, homogeneizar e despejar 20 ml em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar, inverta e guarde na geladeira até o uso.

O pH deve ser 7,3 ± 0,2. A cor do meio desidratado é branca e o meio preparado é âmbar claro, ligeiramente turvo devido à presença de um precipitado floculante.

Meio Czapek em pH ácido

Preparar conforme já descrito, mas adicionando 10 ml de ácido lático estéril a 10% para cada litro de meio preparado. O meio Czapek modificado deve ter pH 3,5 ± 0,2.

Meio Czapek modificado

Pesar 45,4 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água. O resto da preparação é igual ao descrito acima. A cor do meio desidratado é branca e o meio preparado é esbranquiçado. O pH final do meio é 6,8 ± 0,2.

Meio de levedura czapek

Também chamado de Agar de Extrato de Levedura Czapek (CYA). Contém os elementos do clássico ágar Czapek mais extrato de levedura.

Usar

O meio Czapek é usado na busca de microrganismos saprofíticos em amostras de solo, vegetais, grãos, ar, insetos, entre outros.

O ágar Czapek em pH ácido é usado para o crescimento de microrganismos acidofílicos, enquanto o ágar Czapek modificado é especialmente útil para a formação de clamidosporos em espécies do complexo Candida albicans.

Finalmente, o ágar de levedura Czapek é muito útil para o isolamento de Aspergillus e Penicillium.

Semeado

- Agar Zapek

Para a busca de Actinomicetos no solo, proceda da seguinte forma: a amostra é tratada com água fenolizada por 30 min e, em seguida, 1 mL da suspensão é semeado em ágar Czapek. Incubar a 28 ° C por 5 a 7 dias.

Para amostras de vegetais, grãos e insetos, eles são colocados diretamente no ágar. Você também pode fazer diluições e semear 0,1 ml na superfície do ágar.

- ágar Czapek modificado

Para a semeadura, utiliza-se um laço reto ou agulha, é impregnado com o swab e o ágar é inoculado por punção até tocar a base da placa. Incubar por 24 horas a 28 ° C e examinar sob um microscópio acima e abaixo da placa para ver se os clamidosporos se formaram.

Temperatura e tempo de incubação

A temperatura e o tempo de incubação variam dependendo do tipo de microrganismo a ser isolado. As placas são geralmente incubadas por uma a duas semanas em uma faixa de temperatura de 20 a 25 ° C.

No entanto, existem condições específicas para algumas cepas. Por exemplo, a maioria das espécies do gênero Aspergillus crescem otimamente a 30 ° C; porém A. fumigatus cresce a 50 ° C.

Em relação ao tempo de incubação, uma ou duas semanas é normal, porém Candida albicans pode se desenvolver em 24 a 48 horas a 25 ° C.

Características de algumas colônias neste meio

-Penicillium atrovenetum

Desenvolve-se em 12 dias de incubação a 27 ° C. Suas colônias são pequenas (25 mm).

As colônias têm um aspecto aveludado, com uma borda branca definida e uma tonalidade azul esverdeada no centro que vai se tornando cinza com o envelhecimento. O reverso da colônia é laranja, tornando o meio da mesma cor devido à produção de pigmento.

-Aspergillus niger

Desenvolve-se com micélio branco a amarelo e esporos pretos.

-Candida albicans

Desenvolvem-se colônias bege claro cremosas. No ágar Czapek modificado, ele forma clamidosporos.

-Aspergillus parasiticus

Um micélio verde escuro se desenvolve em 7 dias a 25 ° C.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do meio de cultura, podem ser semeadas cepas de controle certificadas, tais como: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger desenvolve micélio branco a amarelo e esporos pretos em cerca de 5 dias, enquanto Candida albicans terá um crescimento satisfatório em 24 horas de incubação a 25 ° C; as colônias são de cor creme.

Limitações

Alguns estudos revelaram que, para a recuperação de Actinomicetos, o ágar com melhor rendimento é o ágar batata dextrose, com ágar Czapek em segundo lugar, mas para a recuperação de Aspergillus e Penicillium, o ágar Czapek é o que proporciona a maior taxa de recuperação.

Referências

Dávila M., et al. Actinomicetos antagonistas contra fungos fitopatogênicos de importância agrícola. Rev. Mex. Ciência. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Disponível em: scielo.org.
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Colaboradores da Wikipedia. Czapek medium. Wikipédia, a enciclopédia livre. 13 de janeiro de 2019, 20:30 UTC. Disponível em: en.wikipedia.org
Laboratórios Conda Pronadisa. Agar Czapek-Dox modificado. Disponível em: condalab.com
Culture Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponível em: Medioscultivo.com