Agar Baird Parker: base, preparação e uso - Ciência - 2023

Contente

o Ágar Baird Parker É um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial. Foi criado em 1962 para a detecção e contagem de estafilococos coagulase positiva (Staphylococcus aureus).

É composto por hidrolisado de caseína pancreática, extrato de carne, extrato de levedura, cloreto de lítio, glicina, piruvato de sódio, telurito de potássio, ágar e emulsão de gema de ovo.

Baird Parker Agar é baseado na capacidade de S. aureus para reduzir a telurita e produzir lecitinase. Ambas as propriedades geram uma colônia com características específicas para esta espécie. Portanto, é altamente eficaz na detecção desse microrganismo.

As colônias típicas de S. aureus São pretos ou cinza escuro, com borda incolor e um halo claro que os envolve, diferenciando-os de outros microrganismos. Este patógeno pode ser encontrado em amostras clínicas, águas, cosméticos e alimentos crus ou cozidos.

O seu diagnóstico ou detecção é de extrema importância, devido à variedade de patologias que produz, como intoxicações alimentares, síndrome da pele escaldada, síndrome do choque tóxico, abscessos, meningites, septicemia, endocardite, entre outras.

Base

Poder nutritivo

Hidrolisado de caseína pancreática, extrato de carne e extrato de levedura são as fontes de nutrientes, vitaminas e minerais necessários para o desenvolvimento microbiano geral, enquanto o piruvato e a glicina são compostos que promovem o crescimento específico de Staphylococcus aureus.

Seletivo

O Baird Parker Agar é seletivo porque contém substâncias que inibem o crescimento da flora que o acompanha, enquanto promove o desenvolvimento de S. aureus. Os compostos inibidores são cloreto de lítio e telurito de potássio.

Diferencial

Isso significa que permite diferenciar o S. aureus do resto dos estafilococos coagulase negativos. S. aureus tem a capacidade de reduzir o telurito a telúrio preto metálico livre, formando colônias pretas ou cinza escuro.

Da mesma forma, a gema de ovo fornece os substratos para demonstrar a presença das enzimas lecitinase e lipase. S. aureus é lecitinase positivo e, portanto, um halo claro será observado ao redor da colônia, indicando que a lecitina foi hidrolisada.

Neste sentido, o aparecimento neste ágar de colônias pretas brilhantes ou cinza escuro com um halo claro ao redor delas indica a presença de S. aureus.

Se uma zona de precipitação se formar, é indicativo de atividade da lipase. Algumas cepas de S. aureus eles são lipase positivos e outros negativos.

No caso de o S. aureus Se a lipase for positiva, será observada uma área opaca ao redor da colônia preta ou cinza-escura e, a seguir, um halo claro devido à ação da lecitinase.

Colônias de bactérias que não S. aureus capazes de crescer neste meio desenvolverão colônias incolores ou marrons, sem um halo ao seu redor.

As colônias pretas atípicas também podem ser vistas com ou sem uma borda incolor, mas sem um halo claro. Estas colônias não devem ser levadas em consideração, não correspondem a S. aureus.

Preparação

Emulsão de gema de ovo

Pegue um ovo de galinha fresco, lave bem e coloque em álcool 70% por 2 a 3 horas. O ovo é então aberto assepticamente e a clara é cuidadosamente separada da gema. Posteriormente, 50 ml da gema são retirados e misturados com 50 ml de solução fisiológica estéril.

Telurito de potássio 1% w / v

Algumas casas comerciais vendem telurito de potássio a 1% pronto para uso. É adicionado ao meio antes que ele se solidifique.

Para preparar esta solução em laboratório, 1,0 g de telurito de potássio é pesado e dissolvido em uma parte de água. Posteriormente, a quantidade de água é completada até atingir 100 ml. A solução deve ser esterilizada pelo método de filtração.

Preparação do meio de cultura

Pesar 60 g do meio desidratado e dissolver em 940 ml de água destilada. Deixe a mistura descansar por aproximadamente 5-10 minutos.

Aplique calor mexendo o meio frequentemente para melhorar o processo de dissolução. Deixe ferver por um minuto. Esterilize na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Deixe repousar até atingir a temperatura de 45 ° C e adicione 50 ml da emulsão de gema de ovo e 10 ml de telurito a 1%. Misture bem e despeje 15-20 ml em placas de Petri estéreis.

Deixe solidificar, arrume invertido em plaquetas e guarde na geladeira até o uso.

O pH final do meio preparado deve ser 6,8 ± 0,2.

Antes de semear uma amostra, espere a placa atingir a temperatura ambiente. Semeie as placas espalhando-as ou semeando na superfície com uma espátula Drigalski.

A cor do meio desidratado é castanho claro e a cor do meio preparado é âmbar claro.

Usar

Amostras clínicas

As amostras clínicas são semeadas diretamente, descarregando-se parte do material em uma das extremidades da placa, e daí é riscado por exaustão. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C.

Amostras de alimentos

Pesar 10 g da amostra de alimento e homogeneizar em 90 ml de água peptonada 0,1%, a partir daí são preparadas diluições se necessário. Inocular as placas em triplicado com 0,3 ml das soluções preparadas e semear na superfície com uma espátula Drigalski. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C.

Esta metodologia permite a contagem das colônias típicas obtidas e é ideal quando da presença de S. aureus acima de 10 CFU por g / ml de amostra.

Se a quantidade de S. aureus Se for pequeno ou com muita flora acompanhante, sugere-se enriquecer a amostra em caldo de tripticase soja com NaCl 10% e piruvato de sódio 1%. Isso irá favorecer o crescimento de S. aureus e irá inibir o desenvolvimento da flora que o acompanha. Tubos turvos são semeados em ágar Baird Parker.

Amostras de água

Em um sistema de filtração a vácuo esterilizado, 100 ml da água do estudo são filtrados e, subsequentemente, a membrana microporosa de 0,4 mícrons é removida com uma pinça estéril e colocada em uma placa Baird Parker. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C. Esta técnica permite a contagem de colônias típicas de S. aureus.

Controle de qualidade

As cepas conhecidas podem ser usadas para avaliar a qualidade do Baird Parker Agar, comoStaphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ouProteus mirabilis ATCC 43071.

No caso de cepas de S. aureus A ATCC é conhecida por reduzir a telurita e são positivas para lipase e lecitinase. Portanto, deve haver um desenvolvimento satisfatório e crescer colônias convexas com um centro preto e uma borda incolor, com um halo opaco e um halo externo claro.

Por sua vez,S. epidermidis espera-se um fraco desenvolvimento neste meio, com colônias cinza-acastanhadas a pretas, sem halo claro.

Para E. coli Y P. mirabilis espera-se que seja total ou parcialmente inibido. Em caso de crescimento, as colônias marrons se desenvolverão sem uma área opaca ou um halo claro.

recomendações

-O meio não deve ser aquecido após a adição do telurito e da gema de ovo.

-O preparo da emulsão de gema de ovo e sua adição no meio é uma etapa muito vulnerável à contaminação. Extremo cuidado deve ser tomado.

-Se houver presença de colônias típicas de S. aureus Deve ser corroborado pela montagem de um teste de coagulase nesta cepa.

-Se houver resultados duvidosos com a coagulase, outros testes confirmatórios devem ser montados.

-Tenha cuidado para não confundir a presença de colônias típicas de S. aureus com as colônias atípicas de cor preta.

Referências

Colaboradores da Wikipedia. Agar Baird-Parker. Wikipédia, a enciclopédia livre. 15 de março de 2017, 19:36 UTC. Disponível em: wikipedia.org/ Acessado em 18 de fevereiro de 2019.
Laboratórios BD. Baird Parker Agar. 2006. Disponível em: bd.com
Britannia Laboratories. Base de ágar Baird Parker. 2015. Disponível em: britanialab.com
Laboratórios Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. Disponível em: http://f-soria.es/Inform
Britannia Laboratories. Telurito de potássio. 2015. Disponível em: britanialab.com
Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carrying of Staphylococcus aureus enterotoxigênico tipo A, em esfregaços nasofaríngeos em manipuladores de alimentos. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
Venezuelan Standard Covenin 1292-89. (1989). Alimentos. Isolamento e contagem Staphylococcus aureus. Disponível em: sencamer.gob.ve