Rosa de bengala: justificativa, procedimento, controle de qualidade - Ciência - 2023

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Rosa de bengala É um teste laboratorial baseado em uma reação antígeno-anticorpo para o diagnóstico de brucelose. A técnica permite detectar anticorpos específicos contra a bactéria Brucella abortus em amostras de soro humano. O resultado pode ser relatado qualitativamente ou semiquantitativamente.

A forma qualitativa expressa se o paciente é positivo ou negativo para o teste, ou seja, se há anticorpos ou não. Enquanto isso, o relatório semiquantitativo é relatado em UI / ml e indica a quantidade aproximada de anticorpos presentes. Ressalta-se que os anticorpos somente serão produzidos se o paciente tiver entrado em contato com o microrganismo.

Por sua grande simplicidade, alta sensibilidade e especificidade, é uma das técnicas de soroaglutinação mais utilizadas na medicina como teste inicial para o diagnóstico desta doença.


Alguns pesquisadores compararam a eficácia do teste Rose Bengal com outras técnicas, como seroaglutinação (antígenos febris) e observaram que, embora haja boa correlação, viram casos isolados em que o teste do antígeno febril foi negativo e Rose de Sparkler positivo.

A diferença obtida deveu-se ao fato de esses pacientes possuírem uma subclasse de anticorpos IgG contra Brucella abortus com melhor capacidade de ligação em pH ácido, portanto, poderiam reagir com o reagente Rose Bengal, mas não com o de antígenos febris.

Nesse sentido, sugeriram que os reagentes da técnica do antígeno febril sejam modificados para um pH ácido para que possam detectar esse tipo de caso.

Base

O Reagente Rose Bengal consiste em uma suspensão antigênica. É composto pela cepa S99 de Brucella abortus,diluído em tampão de lactato ácido (pH 3,6), mais fenol e o corante Rosa Bengala.


Portanto, na amostra o que se busca são os anticorpos anti-Brucella, se estes estiverem presentes irão reagir com o antígeno reagente e será observada uma reação de aglutinação macroscopicamente visível. O teste detecta anticorpos IgM ou IgG.

Isso significa que pode detectar a doença tanto na fase aguda, onde predominam os anticorpos IgM, quanto na fase crônica, onde predominam os anticorpos IgG.

Isso representa uma vantagem, pois aumenta a sensibilidade do teste, mas ao mesmo tempo é uma desvantagem, pois não discrimina uma etapa da outra, pois as reações com anticorpos IgM e IgG são idênticas.

O teste deve ser sempre realizado em conjunto com um controle negativo e um controle positivo. O controle negativo contém soro animal sem anticorpos e o controle positivo contém soro de origem animal com 50 UI / ml de anticorpos anti-Brucella.

Usar

A brucelose é uma doença grave que tende a ser crônica e perigosa, por isso é muito importante que seja diagnosticada precocemente. É uma zoonose e os humanos podem ser infectados pelo contato direto com o material contaminado, sendo as pessoas mais vulneráveis ​​os veterinários e tratadores de animais.


A infecção também pode ocorrer pela ingestão de carnes cruas infectadas, entre outras formas de infecção.

Esta doença ataca localmente ou sistemicamente. A forma sistêmica é a mais grave, pois vários órgãos podem ser afetados, incluindo o sistema endotelial do retículo (fígado, baço, medula óssea), pele (celulite e linfadenopatia), sistema respiratório (pneumonia), sistema musculoesquelético (artrite, sacroileíte e espondilite), entre outros.

O teste Rosa Bengala é uma técnica muito útil para a realização de uma triagem inicial, pois é muito barato, fácil de usar e tem grande especificidade e sensibilidade.

Os casos de falsos negativos e falsos positivos são muito raros e podem ocorrer em pessoas com títulos de anticorpos muito baixos (<25 UI / ml) ou extremamente altos (> 1000 UI / ml), respectivamente.

Processo

materiais

- Kit Rosa Bengala

- Fundo branco da placa de aglutinação

Pipeta -50 µl

-Rotador (opcional)

-Vórtice

Técnica (método qualitativo)

Os kits comerciais do Rose Bengal vêm com reagentes prontos para uso.

-Tempere os reagentes antes de começar a trabalhar.

-As placas de aglutinação têm círculos desenhados, cada um para uma amostra diferente. Use 3 círculos, o primeiro para o controle negativo, o segundo para a amostra e o terceiro para o controle positivo.

-Coloque uma gota ou 50 µl dos controles e a amostra em seu círculo correspondente.

-Misturar o reagente Rosa Bengala usando um vórtice. Coloque uma gota ao lado das colocadas anteriormente.

-Misture com palitos de madeira (use um para cada espécime ou controle). Faça movimentos circulares e espalhe de modo que cubra todo o círculo.

-Coloque a placa em um rotador automático de 80 a 100 RPM ou gire manualmente por 4 minutos. Leia a prova no final deste tempo.

-Verifique se os controles deram conforme o esperado. Compare a reação da amostra de teste com os controles. Reportar como positivo se for observada aglutinação e como negativo se não houver aglutinação.

Um teste positivo indica que o paciente possui uma quantidade igual ou superior a 25 UI / ml de anticorpos anti-Brucella.

Técnica (semiquantitativa)

Se na reação qualitativa a amostra for fortemente positiva, ela pode ser semiquantificada. Para isso, são feitas diluições duplas em série da amostra com soro fisiológico. O procedimento descrito anteriormente é realizado a cada diluição.

Também é interpretado observando a aglutinação macroscopicamente. O resultado será o título da maior diluição em que foi observado um resultado positivo.

Para calcular o valor aproximado de anticorpos anti-Brucella, a seguinte fórmula é usada:

25 IU / ml x título de reação = IU / ml

Por exemplo, se um paciente no teste semiquantitativo apresenta resultado positivo na diluição ½, ¼ e 1/8 e começa a ser negativo a partir da diluição 1/16, isso significa que o paciente possui um título de 8 .

Aplicando a fórmula:

25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml

Controle de qualidade

-Os kits têm prazo de validade e devem ser respeitados. Não deve ser usado se o reagente expirou.

- Durante a utilização, certifique-se de que o reagente não contém partículas sólidas, pois é um sinal de deterioração.

-Mantenha entre 2 e 8 ° C.

-Não congele, este ato danifica o reagente irremediavelmente.

-Efectue sempre o teste em conjunto com os controlos negativo e positivo.

-A técnica tolera amostras de soro com certo grau de lipemia e hemólise, porém não é aconselhável a utilização de soros excessivamente lipêmicos e hemolisados, pois ambas as condições alteram o resultado do teste.

-Sempre traga os reagentes à temperatura ambiente antes de iniciar a análise.

-Não interprete reações que demorem mais do que o tempo recomendado, pois isso gera o relato de falsos positivos, pois após um certo tempo o reagente precipita, simulando uma reação positiva.

-A técnica é 100% sensível e tem uma especificidade de 98%.

-Após uma semiquantificação de 1000 UI / ml existe a possibilidade de observar um efeito pró-zona (falso negativo devido ao excesso de anticorpos em relação à quantidade de antígenos).

Referências

  1. Rubio M, Barrio B e Díaz R. Valor dos testes Rosa de Bengala, Coombs e contra-imunoeletroforese para diagnosticar casos de brucelose humana em que a aglutinação sérica é negativa. Departamento de Microbiologia. Serviço de Microbiologia Clínica. University Clinic. Universidade de Navarra. 406-407. Disponível em: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
  2. "Brucelose."Wikipédia, a enciclopédia livre. 6 de dezembro de 2019, 14:37 UTC. 18 de dezembro de 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
  3. Monlab Laboratories. Monlab rosa bengala - teste. 2016. Disponível em: monlab.es/
  4. Carrillo C, Gotuzzo E. Brucelose. Rev. Peru. Med. Exp. Saúde pública 1997; 14 (1): 63-66. Disponível em: scielo.org
  5. Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Acompanhamento clínico, sorológico e da reação em cadeia da polimerase de uma família com brucelose. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Disponível em: scielo.conicyt.