Biureto: justificativa, reagentes, procedimento, usos - Ciência - 2023

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o Biuret é um reagente utilizado para a determinação de proteínas de cadeia longa e de cadeia curta. É especialmente utilizado na área de química analítica e urinálise para investigar a concentração de proteínas totais no soro, plasma e urina.

Os valores das proteínas podem ser aumentados ou diminuídos em certas patologias. Os sintomas de hipoproteinemia geralmente ocorrem em pacientes com doença renal, em pacientes desnutridos e em pacientes com infecções crônicas.

Já a hiperproteinemia é observada em patologias como mieloma múltiplo, lúpus eritematoso sistêmico, endocardite bacteriana, meningite bacteriana, macroglobulinemia de Waldenstrom, entre outras.

Por outro lado, a presença de proteínas na urina se deve à filtração da albumina pelo rim. Este é um comportamento patológico que deve ser estudado.

Nesse sentido, o Biureto é muito útil, pois permite quantificar a presença de proteínas no soro, plasma, urina, entre muitas outras amostras.

Até o Biureto pode ser utilizado para investigar a presença e concentração de proteínas em amostras pouco exploradas ou de composição desconhecida. Portanto, é amplamente utilizado na área de pesquisa.

O teste de Biureto é baseado na detecção de ligações peptídicas. O teste é realizado em meio alcalino. A amostra deve conter pelo menos duas ligações peptídicas para que se forme um complexo violeta-púrpura. O complexo é formado pela união das ligações e do íon cobre.

Base

O reagente do Biuret é composto de hidróxido de potássio, sulfato cúprico e tartarato de sódio e potássio. O hidróxido de sódio é usado para alcalinizar o meio, pois essa condição é essencial para que a reação ocorra.

A substância que reage com as proteínas é o sulfato cúprico, enquanto o tartarato de sódio tem a função de não permitir a formação do hidróxido de cobre, que tende a se precipitar e interferir na reação.

Se substâncias com ligações peptídicas (polipeptídeos ou proteínas) forem encontradas na amostra, o teste será positivo.

Uma reação é interpretada como positiva quando a solução fica roxa. A cor é produzida pela formação de um complexo entre pelo menos duas ligações peptídicas que possuem o grupo CO-NH e os cáprios cúpricos.

O complexo violeta pode ser formado de duas maneiras: uma é pela perda de prótons dos grupos amida que se ligam ao metal (despronotação), e a outra pela união dos elétrons de oxigênio e nitrogênio que são livres e se ligam com cobre.

Esta reação pode variar em intensidade e cor dependendo do tipo de proteína.

O teste pode ser realizado qualitativa ou quantitativamente. Na forma qualitativa, é relatado como positivo ou negativo. Já na forma quantitativa, a concentração pode ser medida pelo método espectrofotométrico.

A reação é lida entre 540-560 nm. A intensidade da cor é diretamente proporcional à concentração de ligações peptídicas na amostra.

Reagentes

-20% de hidróxido de sódio (NaOH)

-Sulfato cúprico pentahidratado 1% (CuSO₄. 5h₂OU)

- Tetra-hidrato de tartarato de sódio e potássio misturado (KNaC₄H₄OU₆4h₂OU)

Estabilidade do reagente de biureto

-Deve ser mantido refrigerado.

Processo

Técnica

-Coloque 100 µl da amostra ou padrão a ser analisado em um tubo de ensaio.

-Adicionar 2 ml de hidróxido de sódio.

-Misture muito bem.

-Adicionar 5 ml de reagente Biureto.

-Misturar e deixar em temperatura ambiente por 25 minutos, cobrir e proteger da luz.

-Observar a formação ou não da cor e medir espectrofotometricamente.

Curva de calibração

A albumina sérica bovina pode ser usada como padrão para realizar a curva de calibração. Várias concentrações são preparadas a partir dele. Por exemplo 25, 50, 75, 100, 125 e 150%.

A reação é montada com todas essas concentrações conhecidas e a absorbância é lida em um comprimento de onda de 540 nm. Com os dados das concentrações conhecidas e as leituras de absorbância é feita a curva de calibração.

Em cada determinação ou lote de amostras processadas é recomendado montar um padrão. Albumina de soro bovino 0,1-2 mg / ml pode ser usada como padrão de calibração.

As medições são feitas em espectrofotômetro a 540 nm.

A linearidade é atendida até uma concentração de 12 g / dl.

Interferência

Substâncias que interferem com o teste de Biureto

Embora não seja muito frequente, deve-se destacar que algumas substâncias podem interferir durante a execução deste teste. Por exemplo, a presença de amônia pode inibir a formação de cor.

Da mesma forma, outras substâncias podem absorver no mesmo comprimento de onda, como certos pigmentos.

Por outro lado, a interferência pode ser gerada quando uma substância diferente da ligação peptídica forma um complexo com o sal cúprico. Exemplo: alguns carboidratos e certos lipídios.

Se a amostra a ser analisada apresentar algum tipo de precipitado, ela deve ser filtrada ou centrifugada antes da montagem do teste.

Substâncias que não interferem com o teste de Biureto

O teste não é afetado pela presença de:

-Bilirrubina até uma concentração de 20 mg / dl.

-Hemoglobina até uma concentração de 750 mg / dl.

-Dextrano até uma concentração de 30 g / L.

-Triglicerídeos até uma concentração de 4000 mg / dl.

Vantagem

-É um método simples de executar.

-É um teste econômico.

-Tem alta especificidade para proteínas.

-Pouca interferência.

Desvantagens

Tem pouca sensibilidade para detectar baixas quantidades de proteína. O trabalho de Fuentes et al., Afirma que o método de teste do Biureto tem limite de detecção de 1 mg / ml de proteína e limite de quantificação de 3 mg / ml.

No entanto, outras pesquisas realizadas na Universidade da Amazônia relatam valores muito mais baixos. O limite de detecção informado pelo estudo é de 0,020 mg / ml e o limite de quantificação é de 1,33 mg / ml.

Formulários

O reagente ou teste de Biureto é usado para a determinação de proteínas em amostras clínicas e não clínicas em laboratórios de pesquisa e de rotina.

Patologias que ocorrem com um aumento ou diminuição naproteína

Em muitas patologias, é importante determinar a concentração de proteínas totais em amostras clínicas, que pode estar elevada ou diminuída.

Eles são elevados em:

-Mieloma múltiplo,

-Lúpus eritematoso sistêmico,

- Endocardite bacteriana,

-Meningite bacteriana,

Macroglobulinemia de Waldenstrom, entre outros.

É diminuído em:

-Insuficiência renal,

-Pessoas com graus severos de desnutrição,

-Pacientes com infecções crônicas, entre outros.

Amostras clínicas

As amostras clínicas mais comuns são soro, plasma e urina. O valor normal das proteínas no soro ou plasma é 6,0-8,8 gr / dl.

A concentração de proteínas na urina em adultos não excede 150 mg / 24 horas.

Valor normal da relação proteína na urina / creatinina na urina

Bebês: <0,50 mg

Crianças a partir de 2 anos: índice: 0,20 mg

Adultos: <0,2 mg

Amostras não clínicas

A reação do Biureto pode ser usada para muitos tipos de amostras não clínicas, como laticínios, antiveneno ou qualquer substância desconhecida para a qual você deseja investigar a presença de proteínas.

Referências

Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Caracterização físico-química e conteúdo proteico de extratos fluidos de ostra de mangue (Crassostrearizophorae).Jornal Cubano de Química, 26 (1), 66-74. Recuperado em 26 de junho de 2019, em http: //scielo.sld
Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Caracterização funcional de amêndoas de sementes de manga (Mangifera indica L.) Revista Ciência em Desenvolvimento. 2015; 6 (1): 67-75
"Biureto".Wikipédia, a enciclopédia livre. 19 de junho de 2019, 16:37 UTC. 26 de junho de 2019, 22:18
Fuentes F, Quispe I, García J. Padronização do método Biureto para quantificar proteínas totais em soro antibotrópico polivalente produzido no INS National Center for Biological Products. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Disponível em: repositorio.ins.gob.pe
Laboratórios Winer. Proteínas totais. Método colorimétrico para a determinação de proteínas totais em soro e plasma. Disponível em: wiener-lab.com.ar