Agar de sulfito de bismuto: justificativa, preparação e usos - Ciência - 2023

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o ágar sulfito de bismuto é um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial, especialmente formulado para o isolamento de Salmonella enterica subgrupo enterica sorotipo Typhi, entre outras espécies de Salmonella. O meio é conhecido como ágar BSA por sua sigla em Inglês Bismuth Sulfite Agar.

A fórmula original do ágar de sulfito de bismuto foi criada em 1927 por Wilson e Blair (meio de ferro de sulfito de bismuto de glicose); continha sulfito de sódio, glicose, solução de bismuto, citrato de amônio, sulfato ferroso e ágar-ágar.

Hoje existe uma modificação do meio original, composto de extrato de carne, peptonas de carne e caseína, indicador de sulfito de bismuto, glicose, fosfato dissódico, sulfato ferroso, verde brilhante e ágar-ágar.

Existem muitos meios para o isolamento de espécies de Salmonella, mas quando se trata de recuperar o serótipo Typhi, o ágar sulfito de bismuto tem uma vantagem notável sobre eles, pois na maioria das vezes ocorre uma recuperação muito baixa ou nenhuma recuperação desse microrganismo. .

No entanto, é necessário usar mais de um tipo de meio na tentativa de isolar enteropatógenos, pois o ágar bismuto sulfito é menos eficaz para outras espécies de Salmonella e para o gênero Shigella, que são inibidas ou se desenvolvem muito mal. neste ágar.

Deve-se destacar que, de todas as espécies de Salmonella, o sorotipo Typhi é um dos enteropatógenos mais importantes em humanos, sendo este seu único reservatório. Este sorovar causa febre tifóide, gastroenterite, bacteremia e septicemia.

Por este motivo, é relevante incluir este ágar ao analisar amostras de água, fezes ou alimentos onde se suspeite da sua presença.

Base

Como a maioria dos meios de cultura, o Ágar Bismuto Sulfito contém nutrientes para promover o crescimento bacteriano, como peptonas e extrato de carne. Da mesma forma, a glicose funciona como fonte de energia e carbono.

No entanto, nem todas as bactérias crescerão neste meio, pois o Ágar Bismuto Sulfito é um meio seletivo. Ele contém compostos que inibem o crescimento de microrganismos Gram positivos e certas bactérias Gram negativas. Esses compostos são: o indicador sulfito de bismuto e verde brilhante.

Por sua vez, o fosfato dissódico mantém a osmolaridade e o pH do meio.

Além disso, o ágar sulfito de bismuto é um meio diferencial graças à presença de sulfato ferroso, que mostra a formação de H₂S. O H₂S formado por bactérias reage com o sulfato ferroso e forma um precipitado preto insolúvel claramente visível.

Finalmente, o ágar-ágar fornece consistência sólida ao meio.

Preparação

Pesar 52,3 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água. Aqueça a mistura para ferver por 1 minuto, mexendo sempre, até dissolver completamente. Não superaqueça muito. Este meio não é autoclavável, porque o calor extremo danifica o meio de cultura.

Deixe esfriar a 45 ° C e agite antes de servir em placas de Petri estéreis. Recomenda-se fazer chapas com boa espessura. Para isso, deve-se colocar 25 ml em cada prato. Vamos solidificar. Por se tratar de um meio não esterilizado, é normal que seja sugerido seu uso imediato.

No entanto, um estudo realizado por D’aoust em 1977, mostrou que há uma melhor recuperação de Salmonella typhimurium Y Salmonella enteritidis como as idades médias do Ágar Bismuto Sulfito, o desempenho dos serovares não é afetado Typhi Y Paratyphi B.

D’aoust recomenda o uso das placas no 4º dia de refrigeração, embora avise que conforme o meio envelhece a seletividade diminui, desenvolvendo mais facilmente cepas de Proteus vulgaris.

Por esta razão, para amostras altamente contaminadas, como fezes, é preferível usar meio preparado de fresco. Caso contrário, use no dia 4 de sua preparação. Outros autores recomendam o uso dos pratos no dia seguinte ao seu preparo, armazenados na geladeira.

As placas resfriadas devem ser temperadas antes do uso. O pH do meio deve ser 7,5 ± 0,2. O meio bruto é bege e o meio preparado é opalescente cinza-esverdeado.

Formulários

Entre as amostras que podem ser plantadas neste meio estão amostras de fezes, água potável ou residual e alimentos.

Para melhorar os isolados, recomenda-se a realização de um tratamento de pré-enriquecimento com caldo de lactose e após o enriquecimento com caldo de tetrationato ou caldo de selenito cistina, antes da semeadura em ágar sulfito de bismuto.

As placas são incubadas a 35 ° C ± 0,2 por 24 a 48 horas, em aerobiose.

Características das colônias em ágar de sulfito de bismuto

As colônias de Salmonella Typhi eles são geralmente vistos neste ágar em 24 horas com um centro preto e rodeados por um halo verde brilhante. Considerando que, em 48 horas eles ficam completamente pretos devido à formação de sulfeto de hidrogênio.

Salmonella Paratyphi A apresenta colônias com características variáveis. Após 18 horas de incubação, podem ser observadas colônias pretas, verdes ou transparentes com aspecto mucóide. Enquanto isso, às 48 horas eles estão completamente pretos e às vezes com um brilho metálico pronunciado.

S. Paratyphi A tende a escurecer o ambiente ao redor da colônia.

Salmonella sp apresentam colônias pretas ou cinza-esverdeadas, com ou sem brilho metálico, podendo ou não enegrecer o ambiente circundante.

As cepas de coliformes geralmente são totalmente inibidas, mas se conseguem crescer desenvolvem-se como colônias verdes opacas ou marrons sem brilho metálico. Eles não mancham o meio ao redor da colônia.

Limitação

- Inóculos muito fracos podem originar colônias de Salmonella Typhi verde claro, passando despercebido e a cultura sendo relatada como negativa.

- O ágar sulfito de bismuto pode inibir a recuperação de algumas espécies de Salmonella, como S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.

-Este meio inibe a maioria das espécies do gênero Shigella.

–S. Typhi e S. arizonae eles podem dar colônias muito semelhantes.

-Os coliformes que produzem H₂S como Proteus e Citrobacter produzem colônias semelhantes à Salmonella, portanto testes de identificação bioquímica são necessários.

- Deve-se realizar uma boa estriação para obter colônias isoladas; É a única forma de observar as características típicas das colônias do gênero Salmonella.

Controle de qualidade

Para o controle da esterilidade, uma placa não inoculada é incubada a 37 ° C, espera-se que não haja crescimento ou alteração de cor.

Para controle de qualidade, cepas conhecidas como:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Espera-se que Escherichia coli Y Shigella flexneri são parcialmente inibidos pelo desenvolvimento de colônias marrom-esverdeadas e marrons, respectivamente. Considerando que, ambas as salmonelas devem ter um excelente desenvolvimento com colônias pretas com brilho metálico, e finalmente Enterococcus faecalis deve ser totalmente inibido.

Referências

Wilson, W. e E. M. McV. Blair. Uso de um meio de ferro e sulfito de bismuto de glicose para o isolamento de B. typhosus e B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26(4), 374-391. Obtido em .jstor.org
D’aoust JY. Efeito das condições de armazenamento no desempenho do ágar sulfito de bismuto.J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Disponível em: ncbi.nlm.nih.gov
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