Agar de farinha de milho: noções básicas, preparação e uso - Ciência - 2023

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o ágar de fubá é um meio de cultura sólido, com baixo poder nutricional, útil para o subcultivo de certos fungos e para a demonstração de clamidósporos em cepas do complexo.Candida albicans. Em inglês, é conhecido como Corn Meal Agar.

O meio convencional de fubá tem uma composição muito simples, contém fubá, ágar-ágar e água. Devido ao seu baixo nível nutricional, é ideal para uso na manutenção de cepas de fungos por períodos moderados de tempo, principalmente fungos pretos.

Esporulação do complexo Candida albicans é favorecido neste meio, se 1% de Tween 80 é adicionado durante a preparação do ágar. A formação de clamidosporos é característica dessa espécie e praticamente a única que afeta o homem.

Existem outras espécies que formam clamidósporos, mas é improvável que afetem os humanos, comoCandida australis, presente em excrementos de pinguim, ou C. clausenii,que é um saprófito raramente encontrado. Da mesma forma, excepcionalmente a espécie C. stellatoidea Y C. tropicalis eles poderiam formá-los.

Por outro lado, a adição de glicose ao meio de fubá favorece a formação de pigmentos nas cepas de Trichophytom rubrum.

É importante observar que existem fungos que não formam hifas ou pseudo-hifas no ágar de fubá, como Cryptococcus neoformans, diferenciando-se de outros gêneros.

O ágar de fubá pode ser feito em casa, no laboratório, ou também podem ser usados meios comerciais.

Base

A farinha de milho é o substrato, o ágar é o agente de solidificação e a água é o solvente.

O ágar de farinha de milho pode ser suplementado com tween 80 (monooleato de sorbitano ou poliéster polissorbato 80). Este composto reduz a tensão superficial do meio devido ao seu poder emulsificante.

Também cria um ambiente hostil que inibe a multiplicação celular exagerada e estimula o crescimento de hifas, favorecendo também a produção de clamidósporos; o último considerado estruturas de resistência. Essa estrutura auxilia na identificação das espécies de Candida albicans.

Por sua vez, a glicose neste meio aumenta a capacidade de formação de pigmentos de alguns fungos.

Deve-se notar que o meio de farinha de milho com glicose não serve para demonstrar clamidósporos em cComplexo de Candida albicans.

Preparação

Preparação de ágar de fubá caseiro

Pesar 47 g de farinha de milho amarela e dissolver em 500 ml de água destilada. Aquecer a 60 ºC, enquanto a preparação é mexida num período de aproximadamente 1 hora. Em seguida, filtre com um pedaço de gaze e algodão, opcionalmente pode ser filtrado novamente passando o preparado por um papel de filtro Whatman nº 2.

Completar o volume para 1000 ml com água destilada. Adicione 17 g de ágar-ágar, aqueça até dissolver. Autoclave por 15 minutos a 121 ºC.

Sirva em placas de Petri esterilizadas. Guarde na geladeira.

A cor do meio preparado é esbranquiçada com aspecto granuloso.

Se quiser preparar farinha de milho com glicose para a preparação descrita acima, adicione 10 g de glicose.

Agar comercial de farinha de milho

Pesar 17 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. A mistura pode ser aquecida, agitando suavemente para dissolver completamente. Esterilize em autoclave a 121 ºC, a 15 lb, por 15 minutos.

Despeje em placas de Petri esterilizadas. Vamos solidificar. Inverta e guarde na geladeira até o uso. Temperar antes de usar.

O pH deve ser 6,0 ± 0,2 a 25 ºC.

Agar de farinha de milho com Tween 80

Para cumprir a ISO 18416, o ágar de fubá deve ser preparado da seguinte forma:

Pesar 65 gr por litro e adicionar 10 ml de Tween 80. Aquecer e ferver por alguns minutos até dissolver, tomando cuidado para não superaquecer. Esterilize a 121ºC por 15 minutos.

Agar de farinha de milho com glicose

Para aumentar o poder cromogênico das colônias de Trichophyton rubrum e diferenciá-los de T. mentagrophytes, 0,2% de glicose pode ser adicionado à fórmula original. Você não precisa ter Tween 80, pois a glicose inibe a formação de clamidósporos.

Usar

Principalmente, o uso do ágar farinha de milho destina-se ao estudo de cepas de Candida, auxiliando na sua identificação através da observação característica de clamidósporos nas espécies albicans. Ou seja, o uso desse ágar serve como método auxiliar na identificação dessas leveduras.

Ambas as espécies saprofíticas e patogênicas podem se desenvolver neste ágar, mas cada uma forma estruturas miceliais características. Por exemplo, espécies do gênero Torulopsis não produzem micélio e se reproduzem apenas por blastoconídios.

Da mesma forma, as espécies Trichosporon e Geotrichum produzem artroconídios em ágar de fubá e às vezes é difícil distinguir entre um e outro.

Os artroconídios do gênero Geotrichum produzem uma extensão das hifas que lembra um taco de hóquei.

Além disso, a produção de pigmentos usando ágar de farinha de milho suplementado com glicose é útil na identificação de Trichophytom rubrum.

Semeado

Colônias suspeitas de Candida obtidas em meio de cultura primário - ágar Sabouraud - de amostras clínicas, cosméticos, solos, entre outros, são subcultivadas em ágar farinha de milho. O meio é semeado e incubado a 22 ° C durante 24 a 48 horas. O tempo de incubação pode ser aumentado, se necessário.

Demonstração de clamidosporo

Para tanto, o ágar farinha de milho com Tween 80 deve ser inoculado pela técnica de Dalmau. Esse método consiste em pegar uma porção da colônia suspeita com o cabo de platina e fazer três cortes paralelos no meio, mantendo o cabo a 45º. Os cortes devem ser separados por uma distância de 1 cm um do outro.

Posteriormente, um objeto de cobertura previamente inflamado é colocado sobre as raias que foram semeadas, de forma que a metade fique coberta e a outra descoberta.

Incubar as placas semeadas a 30 ° C por 48-72 he, em seguida, examinar microscopicamente através da lamínula.

Manutenção de cepas de fungos

Para a manutenção das cepas, as placas semeadas e cultivadas são mantidas em geladeira (4 a 8 ºC). Desta forma, podem durar várias semanas e ser usados para fins de ensino ou pesquisa.

Controle de qualidade

Para o controle da esterilidade, uma placa é incubada sem inoculação em temperatura ambiente, espera-se que não haja crescimento ou alteração de cor.

Para controle de qualidade, cepas conhecidas como: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Os resultados esperados são inibição parcial para S. aureus Y E. coli. Enquanto um crescimento satisfatório é esperado no resto das cepas.

Aspergillus niger cresce com colônias pretas e esporuladas em um tempo aproximado de 5 dias de incubação.

Candida albicans colônias de leveduras com produção de clamidosporos.

Saccharomyces cerevisiae produzir grandes células de levedura.

Limitações

No fundo da placa forma-se um precipitado amarelo que não deve ser confundido com colônias.

Referências

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