Testes cruzados: para que servem, técnica, fundamento lógico, fases - Ciência - 2023

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Ascrossmatch são uma série de estudos laboratoriais realizados para determinar se os produtos sanguíneos de um doador (principalmente sangue total e concentrados de células sanguíneas) são compatíveis com o sangue do receptor.

É um teste complementar adicional para compatibilidade ABO e fator Rh. O motivo da prova cruzada é que às vezes dois indivíduos (doador-receptor) podem ter o mesmo grupo ABO e Rh, mas seu sangue ainda é incompatível.

Essa incompatibilidade se deve à presença de anticorpos contra uma série de proteínas dos glóbulos vermelhos conhecidas como antígenos menores. Esses antígenos não são testados rotineiramente, pois são para grupo sanguíneo (ABO) e fator Rh.

Isso porque os antígenos menores são muito menos frequentes e têm expressão variável em cada indivíduo, portanto é praticamente impossível agrupá-los em categorias como se faz com o grupo e o fator Rh.

Em vez disso, os glóbulos vermelhos do doador são misturados com o soro do paciente (teste de correspondência principal) e os glóbulos vermelhos do paciente com soro do doador (teste de correspondência menor) para detectar a presença de reações antígeno-anticorpo.

Quando há anticorpos para antígenos menores, no soro do paciente ou do doador, o teste é considerado positivo, de modo que, na maioria dos casos, aquela unidade específica de sangue não pode ser transfundida.

Grupo ABO

Para entender completamente do que se trata as reações cruzadas, primeiro você precisa saber o básico sobre os grupos sanguíneos.

Nesse sentido, o mais importante é saber que o sangue pode ser classificado em quatro grupos: A, B, AB e O.

Cada um desses grupos expressa uma determinada proteína (antígeno) na superfície das hemácias, que é identificada como um elemento estranho pelos anticorpos de um receptor potencial de um grupo diferente.

A coisa mais surpreendente sobre as reações antígeno-anticorpo na correspondência sanguínea é que nenhuma exposição prévia ao antígeno é necessária para que os anticorpos existam. Isso é conhecido como anticorpos naturais.

Anticorpos naturais

Geralmente, para que os anticorpos existam no corpo de um indivíduo, é necessário que os glóbulos brancos do indivíduo tenham sido previamente expostos ao antígeno.

Isso significa que no primeiro contato entre o antígeno estranho e o organismo, não há anticorpos, pois estes são gerados posteriormente, após o contato inicial. Portanto, é impossível para o sistema imunológico ter anticorpos contra, por exemplo, um vírus específico, se não tiver sido exposto a ele no passado.

A única exceção ao acima são os antígenos anti-AB. Nesses casos, a pessoa tem anticorpos contra o antígeno que seus glóbulos vermelhos não possuem, embora nunca tenham entrado em contato com os glóbulos vermelhos de outra pessoa. Isso é conhecido como anticorpos naturais.

Antígenos e anticorpos relacionados ao grupo sanguíneo

Os grupos sanguíneos são determinados no caso do sistema ABO pela presença de antígenos específicos (A ou B) na membrana dos glóbulos vermelhos e, em contraste, anticorpos contra o antígeno ausente na membrana dos eritrócitos.

Assim, uma pessoa com grupo sanguíneo A expressa o antígeno A na superfície de seus glóbulos vermelhos, enquanto há anticorpos anti-B no soro.

Pelo contrário, em pacientes do grupo B, o antígeno B é encontrado enquanto os anticorpos são anti-A.

No entanto, os pacientes com sangue AB têm antígenos A e B. Portanto, não há anticorpos, pois isso destruiria os glóbulos vermelhos dessa pessoa.

Ao contrário, ocorre no grupo O, em que a membrana do eritrócito não apresenta nenhum dos dois antígenos (nem A nem B), enquanto no soro há anticorpos anti-A e anti-B.

Incompatibilidade de grupo ABO

Do exposto, a compatibilidade dos grupos sanguíneos ABO pode ser facilmente deduzida, uma vez que o conhecimento do antígeno da membrana do eritrócito conhece automaticamente os anticorpos no soro. Assim pois:

- O sangue A é compatível com o grupo A e o grupo O.

- O grupo sanguíneo B é compatível com o sangue B e O.

- Pessoas do grupo O só podem receber sangue O (pois têm anticorpos anti-A e anti-B), embora seu sangue seja recebido por todos os outros grupos sem problemas, pois não tem antígenos.

- Finalmente. aqueles que têm o grupo sanguíneo AB podem receber sangue de todos os outros grupos (A, B, O e, claro, AB), uma vez que não possuem anticorpos contra nenhum dos antígenos. No entanto, apenas as pessoas do grupo AB podem receber sangue AB, pois todos os outros grupos têm anticorpos que destroem esses glóbulos vermelhos.

Antígenos menores

Tal como acontece com os grupos ABO, uma série de proteínas pode ser encontrada na superfície dos eritrócitos que funcionam como antígenos da mesma forma que os antígenos do grupo ABO.

No entanto, esses antígenos não estão presentes em todos os indivíduos. Sua combinação é heterogênea e a penetrância (nível de expressão da proteína) é variável, portanto, uma classificação em grupos como o que existe para ABO e Rh é impossível. Por isso, seu nome deriva de “antígenos menores”, também conhecidos como “antígenos de baixa incidência”.

Embora não sejam frequentes, podem existir anticorpos naturais contra antígenos menores. Entre eles, os mais comuns são Lewis, MNSs, anti N, Kell, Duffy, anti Fyb e Kidd. Todos eles responsáveis por reações hemolíticas e pós-transfusionais muito graves.

Além disso, pode haver o caso de sensibilização contra antígenos menores por contato prévio, seja com as referidas proteínas antigênicas devido a transfusões anteriores ou devido a imunidade cruzada.

Imunidade cruzada

Diz-se que existe imunidade cruzada quando dois antígenos de duas fontes diferentes (por exemplo, um glóbulo vermelho e uma bactéria) são muito semelhantes, a ponto de os anticorpos contra uma dessas proteínas antigênicas também reagirem com a outra por serem quase idênticos .

Para entender melhor, pegue o exemplo hipotético anterior (antígenos de um glóbulo vermelho e uma bactéria). Em nenhum dos casos existem anticorpos naturais, mas se uma pessoa for exposta à bactéria, eles irão gerar anticorpos contra ela.

Esses anticorpos reagirão mais tarde contra um glóbulo vermelho se seus antígenos forem muito semelhantes aos da bactéria que induziu a formação dos anticorpos.

Se isso acontecer, os glóbulos vermelhos com aquela proteína antigênica específica não podem ser administrados à pessoa com os anticorpos, pois haveria rejeição. Aqui reside a importância das reações cruzadas.

Para que serve a prova cruzada?

Como é impossível agrupar o sangue de diferentes indivíduos com base nos antígenos menores, a única maneira de saber se existem anticorpos contra os antígenos menores das hemácias de outra pessoa no sangue de uma pessoa é por meio de prova cruzada. .

Nos casos em que os anticorpos estão presentes, ocorre uma reação de hemólise ou aglutinação, razão pela qual se conclui que a reação foi positiva; ou seja, existem anticorpos contra antígenos menores (embora não se saiba exatamente qual). Caso contrário, o teste é negativo.

Base

As correspondências cruzadas são baseadas na reação antígeno-anticorpo. Portanto, com eles é possível detectar se no soro de um receptor existem anticorpos contra os antígenos das hemácias do doador (ou vice-versa), induzindo uma reação antígeno-anticorpo.

Se não houver anticorpos, nenhuma reação ocorre e o teste é considerado negativo. Pelo contrário, se a reação for positiva (há hemólise ou aglutinação durante o teste) pode-se concluir que os anticorpos estão presentes.

Nesse sentido, é importante observar que pode haver anticorpos contra hemácias tanto no soro do doador quanto no receptor. É por isso que existem dois tipos de reações cruzadas.

Tipos de reações cruzadas

Anticorpos para eritrócitos de doadores podem estar presentes no soro do paciente; mas o caso oposto também pode ocorrer, ou seja, anticorpos no soro do doador contra os glóbulos vermelhos do paciente.

É por isso que existem dois tipos de crossmatch:

- Jogo cruzado principal.

- Crossmatch menor.

Ambos os tipos são realizados rotineiramente no banco de sangue antes da transfusão de hemoderivados, pois se algum dos exames der positivo, há alto risco de reações transfusionais que podem colocar em risco a vida do paciente.

Combate cruzado principal

Este teste avalia se o soro do receptor contém anticorpos contra os glóbulos vermelhos do doador.

Se isso acontecer, os hemoderivados não podem ser administrados, pois uma grande quantidade de anticorpos presentes no plasma do paciente destruirá os glóbulos vermelhos do doador muito rapidamente, gerando reações catastróficas no corpo do receptor no processo. Essas reações são tão graves que podem ser fatais.

Crossmatch menor

Nesse caso, é determinado se há anticorpos contra os glóbulos vermelhos do receptor no soro do doador.

Nesse caso, os anticorpos começarão a destruir os eritrócitos do receptor. Porém, como a quantidade de anticorpos é limitada, a reação é menos intensa; embora ainda seja perigoso.

Fases

Tanto o crossmatch principal quanto o secundário são divididos em três fases:

- Salina.

- Térmico ou incubação.

- Coombs.

Na primeira fase, os glóbulos vermelhos e o soro são misturados em solução salina. Em seguida, adiciona-se albumina e a amostra é incubada a 37ºC por 30 minutos para finalmente prosseguir com a fase de coombs.

Técnica

A técnica de prova cruzada é relativamente simples, pois envolve a adição de glóbulos vermelhos do doador ao soro do paciente (prova cruzada principal), bem como os eritrócitos do receptor ao soro do doador (prova cruzada menor).

Para induzir a reação antígeno-anticorpo em um tempo relativamente curto, uma série de etapas padronizadas deve ser seguida. Essas etapas são resumidas de forma simplificada a seguir.

É importante observar que a próxima seção descreve o teste de compatibilidade principal, embora as etapas sejam as mesmas para o teste de compatibilidade menor, mas trocando a origem dos glóbulos vermelhos e do soro.

Fase salina

- Adicione a um tubo de ensaio 2 gotas de soro do receptor (do doador se for a prova cruzada menor).

- Retire uma amostra de glóbulos vermelhos do dador (do receptor, se for a prova cruzada menor).

- Lave e centrifugue os glóbulos vermelhos.

- Ressuspender em uma solução entre 3% e 5%.

- Coloque uma gota desta solução no tubo contendo o soro do receptor.

- Misture delicadamente.

- Centrífuga.

- Leia o resultado na lâmpada de exibição.

Fase térmica

- Adicione 2 gotas de albumina a 22% ao tubo onde foi concluída a fase salina.

- Incube a 37ºC por 30 minutos.

- Centrifugue por 15 segundos.

- Leia o resultado na lâmpada de exibição.

Fase de Coombs

- Retire as células do tubo e lave-as com solução salina.

- Elimine o sobrenadante.

- Adicione duas gotas do reagente de Coombs.

- Misture delicadamente.

- Centrifugue por 15 a 30 segundos.

- Ressuspenda as células e avalie na lâmpada de visualização quanto a aglutinação ou hemólise.

Se houver aglutinação ou hemólise em alguma das fases, o resultado é considerado positivo.

Referências

Hall, T. C., Pattenden, C., Hollobone, C., Pollard, C., & Dennison, A. R. (2013). Políticas de transfusão de sangue em cirurgia geral eletiva: como otimizar as relações cruzadas de transfusão.Medicina transfusional e hemoterapia, 40(1), 27-31.
Silvergleid, A. J., Wells, R. F., Hafleigh, E. B., Korn, G., Kellner, J. J., & Grumet, F. C. (1978). Teste de compatibilidade usando glóbulos vermelhos marcados com 51Chromium em pacientes com crossmatch positivo.Transfusão, 18(1), 8-14.
Kulkarni, N., Ali, M., Haray, P. N., Joseph, A., & Masoud, A. (2006). Sistema eletrônico de correspondência cruzada. A correspondência cruzada pré-operatória de sangue de rotina para ressecções colorretais é necessária mais?Endoscopia, 38(11), Poster_50.
Heal, J. M., Blumberg, N., & Masel, D. (1987). Uma avaliação de compatibilidade cruzada, HLA e ABO para transfusões de plaquetas em pacientes refratários.Sangue, 70(1), 23-30.
Arslan, Ö. (2006). Crossmatching eletrônico.Avaliações de medicina transfusional, 20(1), 75-79.
Wu, K. K., Hoak, J. C., Koepke, J. A., & Thompson, J. S. (1977). Seleção de doadores de plaquetas compatíveis: uma avaliação prospectiva de três técnicas de pareamento cruzado.Transfusão, 17(6), 638-643.
Schonewille, H., Zijl, A. M. V., & Wijermans, P. W. (2003). A importância dos anticorpos contra antígenos de hemácias de baixa incidência na correspondência cruzada completa e abreviada.Transfusão, 43(7), 939-944.