Cromatografia de camada fina: características, para que serve - Ciência - 2023

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o Cromatografia de camada fina É um método que permite a separação e identificação de substâncias presentes em uma mistura. A chamada 'camada fina' é composta por sílica gel (óxido de silício), alumina (óxido de alumínio) e celulose. No entanto, outras preparações podem ser usadas para certas aplicações.

Folhas de vidro, alumínio ou plástico são usadas como suporte para o filme fino. O material que forma a camada delgada serve como fase estacionária da cromatografia, ou seja, aquela que permanece fixa; enquanto o solvente ou a mistura de solventes utilizados constituem a fase móvel, que se move com as substâncias a serem separadas.

A cromatografia em papel segue o mesmo princípio da cromatografia em camada fina. O papel passa a ser a fase estacionária "fina", cuja resolução não é comparada com a obtida com as outras variantes desta técnica.


A distância alcançada por substâncias na cromatografia em camada delgada (veja pontos coloridos) depende da polaridade da fase estacionária, da polaridade do solvente (fase móvel) e da polaridade das substâncias.

Características da cromatografia de camada fina

Generalidades

A cromatografia em camada fina é basicamente um método analítico. Portanto, são utilizadas quantidades muito pequenas das substâncias a serem analisadas.

As folhas de cromatografia em camada fina possuem um suporte rígido de vidro, alumínio ou material celulósico, sobre o qual é colocado o material utilizado para a fase estacionária. Isso depende dos objetivos a serem alcançados com a cromatografia.

Entre os materiais utilizados na cromatografia em camada delgada estão: sílica gel ou sílica gel, alumina (óxido de alumínio), celulose ou silicato de magnésio.

A câmara de cromatografia é composta por um copo ou cilindro de vidro, ao qual é colocada uma tampa de vidro que fecha a câmara hermeticamente, evitando assim o escape dos vapores dos solventes utilizados na cromatografia.


A folha de cromatografia é colocada verticalmente na câmara de cromatografia, apoiada em sua base. A altura dos solventes na câmara de cromatografia é geralmente de 1 cm.

Desenvolvimento

A cromatografia em camada fina consiste em uma fase estacionária e uma fase móvel. A fase estacionária é constituída pelo material utilizado para a realização da cromatografia, por exemplo, sílica gel. Esse material é polar e é utilizado, entre outros usos, na análise de esteróides e aminoácidos.

A fase móvel é composta por uma mistura de solventes, geralmente de natureza volátil e orgânica. Uma mistura de solventes amplamente utilizada é o acetato de etila e hexano.

O solvente sobe por capilaridade sobre a fase estacionária, estabelecendo uma competição entre as substâncias submetidas à cromatografia e os solventes da fase móvel por sítios na fase estacionária.

Se a sílica gel (polar) for usada como fase estacionária, as substâncias polares interagem com ela e realizam um pequeno deslocamento durante a cromatografia. Enquanto isso, as substâncias apolares terão um deslocamento muito maior durante a cromatografia, pois não interagem efetivamente com o gel de sílica.


Desenvolvimento e análise do resultado

A cromatografia é concluída quando o solvente atinge uma altura adequada que não atinge a altura da folha de cromatografia. A lâmina de cromatografia é removida da câmara e a frente do solvente é marcada com uma linha.

A localização das substâncias na cromatografia em camada delgada pode ser visualizada por vários métodos, incluindo: visualização direta com luz ultravioleta, uso de luz ultravioleta em lâminas tratadas com fósforo ou sujeição de lâminas com vapores de iodo. etc.

Na identificação e caracterização das diferentes substâncias é utilizado o denominado fator de retenção (RF). RF = distância alcançada por uma substância / distância alcançada pelo solvente.

O valor de RF é específico para cada substância para uma determinada mistura de solventes da fase móvel, bem como para o tipo de fase estacionária.

Para que serve a cromatografia em camada fina?

A cromatografia em camada fina é usada para identificar as diferentes substâncias que fazem parte de uma mistura. Por exemplo: você pode saber os aminoácidos livres presentes no leite ou outro material.

A cromatografia em camada fina pode identificar o tipo de lipídios presentes em um alimento. Também é utilizado para saber o grau de desenvolvimento de uma reação química orgânica, estabelecendo a presença de reagentes e produtos nas diferentes etapas da cromatografia.

Processo

Primeiro passo

A mistura de solventes é colocada na câmara de cromatografia, utilizando-se um volume tal que sua altura atinja aproximadamente 1 cm.

Segundo passo

É aconselhável antes de iniciar a cromatografia, fechar a câmara hermeticamente e deixar os vapores do solvente saturarem o ar nela.

Terceiro passo

Uma linha é feita com um lápis de grafite a uma altura de 1,5 cm de uma das extremidades da folha de cromatografia. As amostras a serem utilizadas na cromatografia são colocadas na faixa por meio de um capilar de vidro.

Quarto passo

Posteriormente, a folha de cromatografia com as amostras a serem analisadas é colocada na câmara e esta é fechada com a colocação da tampa de vidro.

Quinto passo

O aumento da mistura de solventes é observado até que a frente do solvente atinja uma altura aproximadamente 2 cm abaixo da altura da folha de cromatografia. A folha de cromatografia é então removida da câmara e a frente do solvente é marcada nela com uma linha.

Sexto passo

A folha é colocada em uma estufa para secagem e as substâncias presentes na cromatografia são analisadas por um método de visualização geral ou específico para o material cromatográfico.

Sétimo passo

Os valores de Rf são obtidos para as diferentes substâncias presentes, e com base nos controles cromatográficos, bem como na literatura sobre o assunto, as substâncias são identificadas.

O vídeo a seguir resume de forma simples o que é explicado aqui:

Formulários

A cromatografia em camada fina permite as seguintes análises:

-Componentes de uma droga

-Presença de diferentes metabólitos nos fluidos corporais

-Determinação da pureza de uma determinada substância

-Identificação de corantes, aromatizantes e adoçantes na indústria de alimentos

-Determinação do estado de desenvolvimento de uma reação química orgânica

O desenvolvimento do método HPTLC (Cromatografia em camada fina de alto desempenho) aumentou muito o potencial da cromatografia em camada fina, automatizando seu uso. Por exemplo: na colocação da amostra, no seu desenvolvimento e na análise.

Isso fez do HPTLC um dos métodos mais utilizados nas análises realizadas nas áreas da indústria farmacêutica, bioquímica, cosmetologia, alimentos, medicamentos e meio ambiente.

Referências

  1. Whitten, Davis, Peck & Stanley. (2008). Química. (8ª ed.). CENGAGE Learning.
  2. Wikipedia. (2020). Cromatografia de camada fina. Recuperado de: en.wikipedia.org
  3. Jim Clark. (2019). Cromatografia de camada fina. Recuperado de: chemguide.co.uk
  4. Chemistry LibreTexts. (05 de dezembro de 2019). Cromatografia de camada fina. Recuperado de: chem.libretexts.org
  5. Attimarad, M., Ahmed, K. K., Aldhubaib, B. E., & Harsha, S. (2011). Cromatografia de camada fina de alto desempenho: Uma técnica analítica poderosa na descoberta de medicamentos farmacêuticos.Métodos Farmacêuticos, 2(2), 71-75. doi.org/10.4103/2229-4708.84436
  6. Os editores da Encyclopaedia Britannica. (2020). Cromatografia de camada fina. Recuperado de: britannica.com