Agar Vogel-Johnson: justificativa, preparação e usos - Ciência - 2023

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o Ágar Vogel-Johnson é um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial, especialmente formulado para o isolamento de Staphylococcus aureus. Este meio foi criado por Vogel e Johnson em 1960 a partir da modificação do ágar telurito glicina formulado em 1955 por Zebovitz, Evans e Niven.

A modificação consistiu no aumento da concentração de manitol presente no meio e na incorporação de um indicador de pH. A fórmula atual é composta por tripteína, extrato de levedura, manitol, fosfato dipotássico, cloreto de lítio, glicina, vermelho de fenol, ágar, solução de telurito de potássio a 1% e água.

Deve-se notar que existem outros meios que, como o ágar Vogel-Johnson, são seletivos para o isolamento de S. aureus, tal como ágar manitol salgado e ágar Baird Parker. Nesse sentido, pode-se dizer que a base do ágar Vogel-Johnson é uma mistura entre o ágar manitol salgado e o ágar Baird Parker.

No primeiro, as colônias de S. aureus Eles se distinguem por fermentar o manitol e tornar o indicador de pH amarelo. Por outro lado, no segundo, o S. aureus é caracterizada por reduzir telurito a telúrio e formar colônias cinza a pretas. Ambas as propriedades são observadas no ágar Vogel-Johnson.

Este meio, como suas contrapartes, é útil para a detecção de Staphylococcus aureus em amostras de alimentos, controles sanitários de produtos industriais e em amostras clínicas.

Base

Fornecimento de nutrientes

O meio Vogel-Johnson contém tripteína e extrato de levedura; Ambas as substâncias fornecem aminoácidos de cadeia longa que servem como fontes de carbono e nitrogênio necessários para o crescimento bacteriano. As bactérias capazes de crescer neste meio absorvem os nutrientes dessas substâncias.

Poder seletivo

O ágar Vogel-Johnson é capaz de inibir o crescimento de bactérias Gram negativas e até mesmo de algumas bactérias Gram positivas, favorecendo o desenvolvimento de estafilococos coagulase positivos. As substâncias inibidoras são telurito de potássio, cloreto de lítio e glicina.

Poder diferencial

As substâncias que diferenciam esse meio são o manitol e o telurito de potássio. O manitol é um carboidrato e, quando fermentado, são produzidos ácidos que transformam o meio de vermelho em amarelo, o que ocorre graças à presença do indicador de pH fenol vermelho.

Já o telurito incolor, quando reduzido a telúrio metálico livre, assume uma coloração cinza escuro a preta.

o Staphylococcus aureus fermenta o manitol e reduz o telurito a telúrio. É por isso que as colônias típicas de S. aureus neste meio, eles são cinza ou pretos rodeados por um meio amarelo.

As bactérias que crescem neste meio e não reduzem o telurito ou fermentam o manitol, formarão colônias transparentes envoltas por um meio vermelho, ainda mais intenso que a cor original, devido à alcalinização do meio pelo uso de peptonas.

Por outro lado, as bactérias que reduzem a telurita, mas não fermentam o manitol, crescerão como colônias cinza ou pretas rodeadas por um meio vermelho escuro.

Se o meio foi preparado sem a adição de telurito de potássio, colônias de S. aureus eles se desenvolveriam como colônias amarelas, rodeadas por um meio amarelo, como no ágar manitol salgado.

Equilíbrio osmótico e agente de solidificação

O fosfato dipotássico mantém o equilíbrio osmótico do meio e ajusta o pH à neutralidade 7,2. Enquanto o ágar dá consistência sólida ao meio de cultura.

Preparação

Solução de telurito de potássio 1% w / v

Esta solução não está incluída no meio desidratado, pois não pode ser esterilizada em autoclave. Por isso é preparado separadamente e adicionado ao meio já esterilizado.

Algumas casas comerciais vendem a solução de telurito de potássio a 1% pronta para uso. Se você deseja se preparar em laboratório, proceda da seguinte forma:

Pesar 1,0 g de telurito de potássio e medir 100 ml de água destilada. Dissolva o telurito de potássio em uma parte da água e complete a quantidade de água até atingir 100 ml. Esterilize a solução pelo método de filtração.

Meio de base de ágar Vogel-Johnson

Pesar 60 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. A mistura é aquecida até à ebulição para ajudar na dissolução completa. Durante o processo de dissolução, o meio é agitado frequentemente.

Esterilize em autoclave a 15 libras de pressão e 121 ° C por 15 minutos. Retire da autoclave e deixe descansar até que o meio atinja uma temperatura de aproximadamente 45 a 50 ° C. Adicione 20 ml da solução de telurito de potássio a 1% previamente preparada.

Misture e despeje em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar e peça invertido nos porta-pratos para depois guardar na geladeira até o uso.

O pH final do meio preparado deve ser 7,2 ± 0,2.

Antes de semear uma amostra, espere a placa atingir a temperatura ambiente.

A cor do meio preparado é vermelha.

Usar

Embora possa ser usado para o isolamento de S. aureus em qualquer tipo de amostra, é utilizado principalmente para análises microbiológicas de produtos farmacêuticos, cosméticos e alimentos.

Recomenda-se que o inóculo seja denso. A semeadura pode ser feita pontuando com cabo de platina ou superficie com espátula Drigalski.

As placas são incubadas a 35-37 ° C durante 24 a 48 horas aerobicamente.

Controle de qualidade

As seguintes cepas de controle podem ser usadas para realizar o controle de qualidade no meio Vogel-Johnson:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ouProteus mirabilis ATCC 43071.

O resultado esperado é o seguinte: para cepas de S. aureus Crescimento satisfatório com colônias pretas rodeadas por meio amarelo. Para S. epidermidis crescimento regular com colônias translúcidas ou pretas rodeadas por meio vermelho.

Da mesma forma, para E. coli a inibição total é esperada, e para Proteus mirabilis inibição parcial ou total; se crescer, o fará com moderação e as colônias serão pretas rodeadas por uma cor vermelha.

Referências

Laboratórios BD. VJ (Vogel e Johnson Agar). 2006. Disponível em: bd.com
Britannia Laboratories. Vogel-Johnson Agar. 2015. Disponível em: britanialab.com
Britannia Laboratories. Telurito de potássio. 2015. Disponível em: britania.com
Laboratório de Himedia. Meio Ágar Vogel-Johnson. 2018. Disponível em: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
Base de Agar Vogel-Johnson. Merck Microbiology Manual. 12ª Edição, páginas 502-503. Disponível em: Usuários / Equipe / Downloads
Contribuidores da Wikipédia, “Ágar Vogel Jonhson”, Wikipédia a encyclopedia livre, disponível em: wikipedia.org.
Venezuelan Standard Covenin 1292-89. (1989). Alimentos. Isolamento e contagem Staphylococcus aureus. Disponível em: sencamer.gob.ve