Meio Cary Blair: justificativa, preparação e usos - Ciência - 2023

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o meio Cary Blair É um ágar semissólido, utilizado para o transporte e conservação de amostras biológicas que abrigam patógenos intestinais, microrganismos lábeis e anaeróbicos. Como qualquer meio de transporte, sua função é manter a amostra em ótimas condições até que seja cultivada. Os microrganismos patogênicos presentes, assim como a microbiota que os acompanha, devem permanecer viáveis, mas sem aumentar sua população.

O meio Cary Blair é o resultado da alteração da formulação do meio de transporte Stuart. A modificação foi realizada em 1964 e consistiu na substituição do sistema regulador de pH (glicerofosfato) por um tampão inorgânico fosfatado.

A reformulação foi necessária porque seus criadores perceberam que o glicerofosfato depois de um certo tempo poderia ser metabolizado por algumas bactérias saprofíticas. Estes se multiplicam sobre os patógenos presentes.

Outras alterações foram a eliminação do azul de metileno, bem como o reajuste do pH para alcalinidade (pH 8,4). Todas essas mudanças melhoraram a eficiência dos meios de transporte.

Originalmente, o meio Cary Blair era usado para a manutenção de patógenos intestinais, como Shigella flexneri, Salmonella sp, Vibrio cholerae e Campylobacter sp.

Porém, posteriormente a eficácia em preservar a viabilidade de microrganismos patogênicos exigentes e instáveis, tais como: Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Bordetella pertussis, Streptococcus pneumoniae e alguns anaeróbios.

Base

O meio Cary Blair contém cloreto de sódio, tioglicolato de sódio, fosfato dissódico, cloreto de cálcio e ágar.

O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico do meio, o fosfato dissódico e o cloreto de cálcio equilibram o pH. Por sua vez, o tioglicolato de sódio mantém um baixo potencial de oxidação-redução, enquanto a pequena porção de ágar fornece a consistência semissólida.

O meio Cary Blair não contém substâncias nutritivas, pois a função de meio de transporte é manter a amostra sem que ela sofra alterações em termos de umidade e carga microbiana; ou seja, evita a desidratação da amostra, preservando a viabilidade e a quantidade dos microrganismos presentes.

Finalmente, o pH levemente alcalino evita a morte de microorganismos por acidez, principalmente Vibrios são muito sensíveis aos ácidos.

Preparação

A mídia Cary Blair está disponível comercialmente como um dispositivo especial pronto para uso. O sistema de transporte é coberto por um saco plástico Peel Pack. Em seu interior, contém um cotonete para a coleta da amostra e o tubo recipiente para o meio semissólido Cary Blair.

Também no mercado existem casas comerciais que fornecem o meio desidratado para seu preparo em laboratório.

Para isso, pese 13,2 g do meio desidratado e dissolva em um litro de água destilada. Aqueça e agite a preparação até que esteja completamente dissolvida. Distribuir o meio em tubos de ensaio com tampa de rosca (baquelite).

Cozinhe os tubos no vapor por 15 minutos. Deixe esfriar e mantenha em temperatura ambiente até o uso.

O meio Cary Blair não inoculado pode ser armazenado de forma ideal por até 18 meses em temperatura ambiente.

O pH do meio deve ser ajustado para 8,4 ± 0,2. A cor do meio preparado é bege, com uma certa opalescência.

Usar

Tipo de amostras

O Cary Blair Medium é usado quando as amostras de fezes, esfregaços retais e esfregaços vaginais não podem ser processados imediatamente.

Quando um meio de transporte não está disponível, as amostras podem ser armazenadas a -70 ° C.

Amostragem

A zaragatoa é impregnada com a amostra e introduzida no meio Cary Blair, sem atingir o fundo.

Identificação da amostra

O meio Cary Blair deve ter uma etiqueta onde são colocados os dados básicos, tais como: nome e sobrenome do paciente, número de identificação da amostra, origem da coleta da amostra, médico assistente, data e hora da coleta. amostra, diagnóstico presuntivo, tratamento com antibióticos.

Transferir

Bem coberto e transportado em temperatura ambiente para amostras fecais. Já para amostras vaginais em busca de microrganismos anaeróbicos, é recomendado o transporte das amostras a 4 ° C.

Em todos os casos, o tempo de transferência recomendado é de 4 a 6 horas, com um máximo de 24 horas.

Se a presença de Campylobacter jejuni em amostras de fezes e estas não podem ser processadas em 24 horas, o armazenamento em meio Cary Blair a 4 ° C é recomendado.

Pesquisa realizada no meio de transporte Cary Blair

Diversos estudos têm demonstrado que o meio Cary Blair pode permanecer viável para microorganismos enteropatogênicos do gênero Shigella e Salmonella por até 49 dias após a coleta da amostra.

Por sua parte, Vibrio cholerae, outro importante patógeno intestinal, é capaz de sobreviver por 22 dias, enquanto Yersinia pestis (agente causador da peste bubônica e pneumônica) pode ser recuperado após 75 dias.

Porém, apesar da durabilidade demonstrada em termos de recuperação desses microrganismos, recomenda-se que as amostras colhidas sejam transportadas em meio Cary Blair para o laboratório o mais rápido possível.

Da mesma forma, assim que a amostra chegar ao laboratório, deve ser semeada sem demora nos respectivos meios de cultura.

Por outro lado, o meio Cary Blair, além de ser útil para o transporte de microrganismos facultativos, também é recomendado para amostras que contenham patógenos anaeróbios.

Nesse sentido, DeMarco e colaboradores em 2017 realizaram um estudo intitulado: Sobrevivência de microrganismos vaginais em três sistemas de transporte disponíveis comercialmente.

Eles demonstraram que o meio de transporte Cary Blair é o melhor meio de transporte para a preservação e recuperação de microrganismos anaeróbios vaginais. Da mesma forma, eles mostraram que a maior taxa de recuperação foi alcançada quando a temperatura de transferência foi de 4 ° C.

Portanto, conclui-se que a temperatura de transporte para esfregaços vaginais (microrganismos anaeróbios) deve ser de 4 ° C. Já para amostras fecais em busca de microorganismos facultativos, a temperatura ideal é a ambiente.

Controle de qualidade

Para avaliar o controle de qualidade do meio de transporte Cary Blair, cepas conhecidas comoShigella Sonnei ATCC 11060,Salmonella choleraesuis ATCC 14028,Vibrio cholerae Y Campylobacter sp.

O meio é inoculado com a cepa escolhida e mantido em temperatura ambiente por 24 horas. Em seguida, são semeados nos meios de cultura correspondentes. Em todos os casos, espera-se uma recuperação satisfatória do microrganismo em questão.

Referências

DeMarco AL, Rabe LK, Austin MN, et al. Sobrevivência de microrganismos vaginais em três sistemas de transporte disponíveis comercialmente.Anaeróbio. 2017; 45: 44–49.
Wasfy M, Oyofo B, Elgindy A, Churilla A. Comparação de meios de preservação para armazenamento de amostras de fezes.J Clin Microbiol. 1995; 33 (8):2176–2178.
Dan M, Richardson J, Miliotis MD, Koornhof HJ. Comparação de meios de preservação e condições de congelamento para armazenamento de amostras de fezes. J Med Microbiol. 1989; 28 (2):151-4.
Koneman E, Allen S, Janda W., Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
Laboratórios Conda Pronadisa. Meio Cary Blair. Disponível em: condalab.com
Laboratório Metrix. Cary Blair. Disponível em: metrixlab.mx