Agar EMB: justificativa, preparação e uso - Ciência - 2023

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o Ágar EMB é um meio de cultura sólido seletivo e diferencial utilizado para o isolamento de bacilos Gram negativos, principalmente da família Enterobacteriaceae, e outros bacilos Gram negativos não fastidiosos. Também é conhecido pela sigla EAM, que significa eosina-azul de metileno.

Este meio foi criado por Holt-Harris e Teague em 1916. Ele contém peptona, lactose, sacarose, fosfato dipotássico, ágar, eosina, azul de metileno e água. É muito semelhante ao Agar MacConkey, especialmente quando se usa o Agar EMB Modificado de Levine, que não contém sacarose.

Na verdade, cada laboratório decide se vai trabalhar com um ou com o outro, pois cumprem a mesma função, embora bioquimicamente sejam diferentes.

Ele ainda tem a mesma desvantagem do ágar MacConkey clássico em termos de produção de enxameação pelo gênero Proteus. Portanto, para evitar esse fenômeno, a concentração do ágar pode ser aumentada em até 5%.

Base

Seletivo

O ágar EMB é sutilmente seletivo porque contém os corantes de anilina (eosina e azul de metileno), que atuam como inibidores, impedindo o crescimento da maioria das bactérias Gram positivas e alguns bastonetes Gram negativos fastidiosos.

No entanto, este ágar tem a desvantagem de que algumas bactérias Gram positivas podem resistir à presença de substâncias inibidoras e crescer como pequenas colônias pontilhadas incolores, como Enterococcus faecalis e alguns Estafilococo.

Certas leveduras também podem crescer, como Complexo de Candida albicans, o que resultará em colônias rosa muito pequenas. Os clamidósporos podem até desenvolver-se a partir desta levedura se a amostra for profundamente semeada.

Diferencial

Por outro lado, o ágar EMB também é um meio diferencial, uma vez que esses corantes juntos (eosina e azul de metileno) têm a propriedade de formar um precipitado em pH ácido, portanto, servem como indicadores de sua produção.

Assim, bactérias fermentadoras de lactose ou sacarose fracamente produzem colônias roxas em 24 a 48 horas. Por exemplo, os gêneros Klebsiella, Enterobacter e Serratia.

As bactérias que fermentam fortemente a lactose, como Escherichia coli, ou sacarose, comoYersinia enterocolitica ou Proteus penneri, eles formam um precipitado preto-esverdeado, dando uma aparência de brilho metálico característico nessas espécies.

Deve-se notar que, se meio EMB levina (sem sacarose) for usado,Yersinia enterocolitica Y Proteus penneri eles irão produzir colônias claras.

As bactérias que não fermentam lactose ou sacarose são nutridas pela presença de peptonas, que fornecem os aminoácidos e o nitrogênio necessários para o crescimento bacteriano e produzem colônias claras. Por exemplo, os gêneros Salmonella e Shigella, entre outros.

Da mesma forma, é importante destacar que o gênero Acinetobacter pode apresentar colônias de azul lavanda, embora não seja fermentador de lactose ou sacarose, mas tem a propriedade de fixar o azul de metileno em sua parede celular. Isso também pode acontecer com outras bactérias oxidativas.

Preparação

O meio desidratado original é bege claro.

Para a preparação desse meio de cultura, 36 gramas do meio desidratado devem ser pesados e suspensos em um frasco contendo um litro de água destilada.

Após deixar a mistura descansar por 5 minutos, leve o frasco a uma fonte de calor, mexendo vigorosa e constantemente até ferver e se dissolver completamente.

Em seguida, o meio de cultura já dissolvido deve ser esterilizado em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Ao final do tempo, é retirado da autoclave e deixado em repouso por alguns instantes. Em seguida, ainda quente (45-50 ° C), 15-20 ml de ágar é servido em cada placa de Petri estéril. O meio deve ser azul tornassol.

Depois de servir, as placas são deixadas ligeiramente descobertas até que o ágar esfrie ligeiramente. Eles são então cobertos e podem se solidificar completamente. Posteriormente, são dispostos em porta-pratos invertidos e armazenados em geladeira (8 ° C) até o uso.

Este procedimento é realizado preferencialmente em uma capela de fluxo laminar ou na frente do queimador de Bunsen para evitar contaminação.

É importante lembrar que cada casa comercial indicará a quantidade a ser pesada para a preparação do meio de cultura.

O pH final do meio deve ser 7,2 ± 0,2

Formulários

Este meio é utilizado para semear urina e fezes ou qualquer tipo de espécime clínico, principalmente se houver suspeita de presença de bastonetes Gram negativos não fastidiosos, como os bacilos da família Enterobacteriaceae, que crescem muito bem neste meio.

As bactérias enteropatogênicas dos gêneros Shigella e Salmonella são diferenciadas por suas colônias incolores ou ligeiramente âmbar.

Outros bacilos não fermentadores de lactose, como Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, entre outros, também crescem.

Da mesma forma, este meio é muito útil na análise microbiológica de alimentos e água, pois é ideal para a fase completa confirmatória da determinação de coliformes, ou seja, para corroborar a presença de E. coli de caldos turvos EC, da técnica do número mais provável (NMP).

Controle de qualidade

Para verificar se o meio de cultura recém-preparado funciona bem, as cepas de controle podem ser plantadas para observar as características das colônias e verificar se estão dando conforme o esperado.

Para isso, as cepas ATCC ou cepas bem identificadas de E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa e algumas bactérias Gram positivas, como S. aureus.

Espera-se que E. coli Gera colônias pretas azuladas bem desenvolvidas com brilho metálico verde. Em tanto que, Enterobacter aerogenes Y Klebsiella sp eles devem dar colônias de muco preto-azuladas bem desenvolvidas.

Por sua parte, Salmonellatyphimurium Y Shigella flexneri, devem desenvolver colônias grandes, incolores ou ligeiramente âmbar.

Finalmente o gênero Pseudomonas aeruginosa cresce como colônias incolores de tamanho irregular, enquanto as bactérias Gram-positivas devem ser totalmente inibidas ou crescer esparsamente com colônias muito pequenas.

Pensamentos finais

Às vezes, a esterilização faz com que o azul de metileno diminua, mostrando um meio de cor laranja. Para que o azul de metileno oxide e recupere a cor roxa, ele deve ser misturado suavemente até que a cor seja recuperada.

Além disso, após a esterilização, o corante pode precipitar, por isso deve ser bem misturado antes de servir as placas de Petri.

Referências

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