Agar Endo: base, preparação e uso - Ciência - 2023

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o endo ágar ou O meio Endo é um meio de cultura sólido e diferencial com um certo grau de seletividade. A fórmula original foi criada por Endo em 1904 para diferenciar bactérias fermentadoras de lactose das não fermentadoras. Inicialmente, foi projetado para isolar Salmonella typhi, mas depois o objetivo do meio voltou-se para a busca de coliformes.

O princípio do Endo Agar permaneceu, mas sua formulação sofreu inúmeras mudanças ao longo dos anos. Atualmente, o meio é composto de digestão péptica de tecido animal, lactose, hidrogenofosfato dipotássico, sulfito de sódio, fucsina básica e ágar.

O principal uso do meio tem sido associado ao isolamento e diferenciação de bacilos Gram negativos pertencentes à família Enterobacteriaceae e a outras famílias próximas.

Por muito tempo foi usado na detecção de coliformes em amostras de água, laticínios e alimentos, mas hoje o uso deste meio foi substituído por outros com funções semelhantes. No entanto, alguns laboratórios de microbiologia usam este ágar para o isolamento de Enterobacteriaceae de amostras de origem clínica.

Base

O ágar Endo contém peptonas que servem como fonte de aminoácidos, nitrogênio, carbono e energia, necessários para o crescimento de microorganismos pouco exigentes.

Por outro lado, o caráter ligeiramente seletivo do ágar é proporcionado pela adição de sulfito de sódio e fucsina básica; ambos os componentes inibem parcial ou totalmente o crescimento da maioria das bactérias Gram positivas.

O caráter diferencial é dado pela presença do carboidrato fermentável, que no caso é a lactose e a fucsina básica, que também serve como indicador de pH.

As bactérias Gram negativas que crescem neste ágar e são capazes de fermentar lactose formarão fortes colônias rosa; sendo patognomônico de Escherichia coli a formação de colônias vermelho-escuras com brilho metálico esverdeado iridescente. Isso se deve à alta produção de ácidos da fermentação de carboidratos.

Deve-se notar que o meio ao redor das colônias também fica com uma cor rosa forte. Enquanto que os bastonetes Gram negativos não fermentadores de lactose formam colônias rosadas claras semelhantes ao meio ou incolores.

O hidrogenofosfato dipotássico equilibra o pH do meio e o ágar é o componente que fornece a consistência sólida.

Preparação

Ágar Endo

Pesar 41,5 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. Aqueça a mistura com agitação frequente até que o meio esteja completamente dissolvido. Esterilize em autoclave a 121 ° C, a 15 lb de pressão, por 15 minutos.

Ao retirar da autoclave, deixe esfriar a uma temperatura de aproximadamente 45-50 ° C, agite a mistura para homogeneizar antes de servir. Despeje 20 ml em placas de Petri estéreis.

Deixe os pratos solidificar, inverta e guarde em um plaquero ou embrulhe com papel escuro antes de guardar na geladeira. É muito importante proteger o meio preparado da luz direta. Uma prática recomendada é preparar a quantidade exata de que você precisará.

Se armazenadas no refrigerador, as placas devem ser aquecidas antes do uso.

O pH do meio deve estar entre 7,2 a 7,6 e a cor do meio preparado é rosa claro.

Variante de ágar M-endo

Existe uma outra versão do ágar Endo (m-Endo) que segue a fórmula de McCarthy, Delaney e Grasso, que contém mais compostos e varia na forma de preparação.

Esta variante contém: lactose, triptose, digestão enzimática de caseína, digestão enzimática de tecido animal, cloreto de sódio, fosfato de potássio dibásico, sulfito de sódio, extrato de levedura, fosfato de potássio monobásico, fucsina básica, desoxicolato de sódio, sulfato de lauril sódio e ágar.

Neste caso, 51 g do meio desidratado são pesados e suspensos em 1 litro de água destilada contendo 20 ml de etanol.

Aqueça ligeiramente, mexendo sempre, até que o meio se dissolva completamente. Não deve ser superaquecido e não deve ser autoclavado. Uma vez que a mistura estiver homogênea, sirva em placas de Petri estéreis e deixe solidificar.

Usar

Em alguns países, ainda é usado para contar coliformes totais e fecais em amostras de alimentos e água, especialmente em busca da presença de Escherichia coli como principal indicador de contaminação fecal.

O M-Endo Agar é recomendado pela American Public Health Association (APHA) para o monitoramento e controle de programas de desinfecção e tratamento de águas residuais, bem como para a avaliação da qualidade da água potável.

O método mais utilizado é a filtração por membrana, após enriquecimento da amostra com caldo de Laurilsulfato por 2 a 4 horas.

Também pode ser usado como substituto do ágar EMB na análise microbiológica de alimentos e água pela técnica do número mais provável (NMP), especificamente na fase de confirmação completa para corroborar a presença de E. coli de caldos turvos de CE.

Controle de qualidade

Cepas de controle conhecidas ou certificadas são semeadas para avaliar a qualidade do lote de ágar Endo preparado.

Entre as cepas que podem ser utilizadas para esse fim estão: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 eEnterococcus faecalis ATCC 11700.

As cepas são semeadas por exaustão e são incubadas a 37 ° C por 24 horas em aerobiose.

Os resultados esperados são:

Para Escherichia coli: colônias vermelhas fortes, com brilho metálico.
Para E. cloacae Y K. pneumoniae as colônias devem ser mucóides rosadas.
No caso de S.typhimurium, S. flexneri e P. mirabilis as colônias são geralmente rosa pálido ou incolores.
Finalmente,E. faecalis espera-se que seja parcialmente inibido, portanto seu crescimento deve ser pobre com colônias rosa fortes muito pequenas.

Limitações

-Endo médio possui baixo poder seletivo, portanto, é possível que alguns microrganismos Gram positivos como Staphylococcus, Enterococcus e até leveduras possam crescer.

-Outros bacilos não pertencentes à família Enterobacteriaceae podem se desenvolver neste meio, como por exemplo Pseudomonas sp Y Aeromonas sp. As características dessas cepas são colônias irregulares incolores.

-Este meio preparado é muito sensível à luz, portanto, a exposição prolongada a ela deteriora o sistema do indicador, danificando irreversivelmente o meio.

-Os componentes do meio são considerados cancerígenos, portanto o contato direto deve ser evitado.

-O meio desidratado é muito higroscópico e deve ser mantido em sua embalagem original à temperatura ambiente, hermeticamente fechado e em ambiente seco.

Referências

Laboratórios BD. Endo Agar. 2013. Disponível em: bd.com
Neogen Laboratories. M Endo Agar. Disponível em: foodsafety.neogen.com
"Agar Endo."Wikipédia, a enciclopédia livre. 7 de setembro de 2017, 08:27 UTC. 28 de fevereiro de 2019, 22:55. Disponível em: en.wikipedia.
Laboratório MercK. Agar Endo. 2019. Disponível em: merckmillipore.com
Laboratórios de fichas técnicas. M –Endo Agar LES. 2015. Disponível em: liofilchem.net